熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization， FISH）是一種分子細胞遺傳學(xué)技術(shù)，是20世紀80年代末期發(fā)展起來的一種非放6射性原位雜交技術(shù)。目前這項技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于動植物基因組結(jié)構(gòu)研究、染色體結(jié)構(gòu)變異分析、病毒感5染分析、人類產(chǎn)前診斷、腫5瘤遺傳學(xué)和基因組進化研究等許多領(lǐng)域。FISH的基本原理是用熒光標記的單鏈核酸為探針，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行特異性結(jié)合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸?？捎脽晒鈽擞浀奶结樦苯优c染色體進行雜交從而對基因進行染色體定位。

就DNA探針和RNA探針的比較，ISH，DNA探針在雜交過程中會出現(xiàn)探針雙鏈之間退火的可能，也更傾向于在溶液中形成大分子的探針聚合體，從而影響其滲透能力。而RNA 探針的應(yīng)用，將提高DNA-RNA雜交子的熱穩(wěn)定性。

Tips：RNA探針因其單鏈、高分子結(jié)合力、可適應(yīng)高溫雜交的特性，其檢測特異性和靈敏度均優(yōu)于DNA探針。常用的RNA探針標記方法為構(gòu)建質(zhì)粒后進行轉(zhuǎn)率合成。通過PCR擴增的方法，可以更方便地進行RNA探針的制備；RNA探針合成后，還需驗證其對目標片段檢測的靈敏度和特異性。

原位雜交中探針的選擇

DNA探針、RNA探針和寡核苷酸探針均能通過不同的酶促分子反應(yīng)進行標記。寡核苷酸探針的長度較短，因此避免了探針內(nèi)部退火的問題，在雜交時的滲透能力也更好，探針與靶標的接觸這是影響原位雜交是否成功的重要因素之一。DNA探針、RNA探針在合成時需要控制探針片段長度，通常300-1000bp左右，能覆蓋到較長片段的靶核酸序列，增加檢測的靈敏度。

ISH-武漢思特進公司(圖)由武漢思特進科技發(fā)展有限公司提供。武漢思特進科技發(fā)展有限公司為客戶提供“動植物，細菌，細胞生物實驗”等業(yè)務(wù)，公司擁有“思特進”等品牌，專注于辦公、文教項目合作等行業(yè)。，在湖北省武漢市江夏區(qū)高新四路40號葛洲壩的名聲不錯。歡迎來電垂詢，聯(lián)系人：夏經(jīng)理。