細(xì)胞凍存的操作步驟

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血的凍存培養(yǎng)液；

2. 取對數(shù)生長期的細(xì)胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，加入適量胰蛋白酶（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細(xì)胞消化下來；

4. 離心1000rpm，凍存袋，5min；

5. 去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，凍存袋，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細(xì)胞的密度為5×106/ml～1×107/ml；

6. 將細(xì)胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；

7. 在凍存管上標(biāo)明細(xì)胞的名稱，凍存時間及操作者；

8. 凍存：標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細(xì)胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

凍存細(xì)胞的裝置及方法

本發(fā)明的裝置由細(xì)胞凍存袋;細(xì)胞凍存盒，細(xì)胞架組成，細(xì)胞凍存袋置于細(xì)胞架上，細(xì)胞架置于細(xì)胞凍存盒內(nèi).批量凍存細(xì)胞的方法:將細(xì)胞懸液裝入細(xì)胞凍存袋中置于細(xì)胞架上，CS250凍存袋，再將細(xì)胞架放入細(xì)胞凍存盒內(nèi);將細(xì)胞凍存盒投入液氮罐或-7O°C以下冷凍設(shè)備冷凍24小時，將細(xì)胞凍存袋取出投入液氮中或-70CI以下冷凍設(shè)備長期凍存，當(dāng)需解凍細(xì)胞時，拉出細(xì)胞凍存袋放入38C-39C℃ 的溫水中解凍當(dāng)凝固物都融化為液體后移入無菌操作臺，按無菌操作程序操作將細(xì)胞凍存袋中的細(xì)胞懸液分裝入離心管中離心，200-074-400凍存袋，棄上清液，按常規(guī)解凍細(xì)胞來操作.本發(fā)明的細(xì)胞凍存袋凍存細(xì)胞體積達(dá)50-200ml，整套裝置直接投入液氮中或放入-70°C以下冷凍設(shè)備.

凍存袋注意事項

可用于細(xì)胞在-196℃液氮中的存儲和轉(zhuǎn)運(yùn)。所有凍存袋都是無菌即用型包裝。凍存袋對于大量細(xì)胞的凍存非常方便，但使用過程中還有些小地方需要注意。較大凍存體積的推薦是參照凍存袋平放，液體厚度8mm時液體的體積。增加凍存液體的量，凍存袋到是能裝下，但細(xì)胞復(fù)蘇的時候就麻煩了，液體厚度太大，融化所需時間太長，細(xì)胞活率要受很大的影響??！

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