細(xì)胞增殖檢測(cè)

     本公司應(yīng)用MTT比色法，細(xì)胞， 檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)。其檢測(cè)原理為huo細(xì)胞內(nèi)線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶能催化外源性無(wú)色的MTT形成藍(lán)色的結(jié)晶Formazan，并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二jia基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的Formazan，用酶聯(lián)mian疫檢測(cè)儀在一定波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，流式細(xì)胞，可間接反映huo細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。

     該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫liu藥wu篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)、以及腫liu放she敏感性測(cè)定等。服務(wù)內(nèi)容      1. 細(xì)胞接種：收到客戶(hù)細(xì)胞后，我們會(huì)用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞，得出細(xì)胞懸液濃度。計(jì)算出應(yīng)稀釋的倍數(shù)，按MTT試劑盒要求在96孔板內(nèi)接種 相應(yīng)濃度的細(xì)胞懸液；

     2. 細(xì)胞培養(yǎng)：然后在無(wú)菌恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)接種好的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，并實(shí)時(shí)觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)；  

     3. yao物處理并呈色：按不同濃度梯度加入yao物作用細(xì)胞；

     4. 溶解，比色：加入MTT檢測(cè)試劑，按操作要求孵育相應(yīng)時(shí)間，在mei標(biāo)儀內(nèi)檢測(cè)對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的吸光值。并處理數(shù)據(jù)得出比色結(jié)果。

磁性細(xì)胞標(biāo)記方式

應(yīng)用MACS技術(shù)進(jìn)行磁性細(xì)胞分選重要的一點(diǎn)是高質(zhì)量的標(biāo)記。要盡可能地增強(qiáng)陽(yáng)性細(xì)胞的標(biāo)記，并減弱背景染色。有兩種基本的磁性標(biāo)記方式:直接標(biāo)記和間接標(biāo)記。

1、直接磁性細(xì)胞標(biāo)記(Direct magnetic cell labeling)

(磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞)直接標(biāo)記是快速、zui特異的磁性標(biāo)記方法。目前有多種分選人、小鼠、大鼠以及非人類(lèi)靈長(zhǎng)類(lèi)細(xì)胞的MACS直標(biāo)微珠可供選用。

2、間接磁性細(xì)胞標(biāo)記(Indirect magnetic cell labeling )

(磁珠結(jié)合不需要的細(xì)胞，游離于磁場(chǎng)的細(xì)胞為所需細(xì)胞)間接磁性細(xì)胞標(biāo)記需要聯(lián)合使用單ke隆或者多ke隆抗ti和MACS間標(biāo)微珠。未結(jié)合抗ti、生物素化抗ti或者熒光素標(biāo)記抗ti均可作為一抗標(biāo)記細(xì)胞，再使用抗免yi球蛋白微珠、抗生物素或鏈霉親和素微珠、抗熒光素微珠作為二抗磁性標(biāo)記細(xì)胞。幾乎針對(duì)任何種系任何細(xì)胞的任何一種單抗或多抗，均可用于間接標(biāo)記。間接標(biāo)記主要在如下情況時(shí)選用:當(dāng)沒(méi)有直標(biāo)磁珠時(shí);需要用幾種抗ti的混合物同時(shí)分選或去除多種類(lèi)型的細(xì)胞;間接標(biāo)記有放大作用，轉(zhuǎn)染，因此可在磁性分選抗原表達(dá)弱的目的細(xì)胞時(shí)使用;使用自備或者配體的磁珠分選中。( -般而言，陰性分離法的磁珠用量比陽(yáng)性分離法的大，陽(yáng)性分離法用行更多。)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)

操作步驟

1.將長(zhǎng)滿(mǎn)細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來(lái)的培養(yǎng)液棄去。

2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，細(xì)胞周期，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。

3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀(guān)察細(xì)胞。隨著時(shí)間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時(shí)將胰酶棄去，加入10m培養(yǎng)液終止消化。觀(guān)察消化也可以用肉眼，當(dāng)見(jiàn)到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)zhen孔空隙時(shí)終止消化。一般室溫消化時(shí)間約為1- -3分鐘。

4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實(shí)踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37°C下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀(guān)察貼壁生長(zhǎng)情況。

附:消化液配制方法:

稱(chēng)取0.25克胰酶蛋白酶(活力為1 : 250)， 加入100ml無(wú)Ca2 、Mg2 的Hank"s液溶解，濾器過(guò)濾chu菌，4°C保存，用前可在379C下回溫。胰酶溶液中也可加入EDTA，使zui終濃度達(dá)0.02%。

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