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細(xì)胞分化
細(xì)胞分化是指同一來源的細(xì)胞逐漸產(chǎn)生出形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征各不相同的細(xì)胞類群的過程,其結(jié)果是在空間上細(xì)胞產(chǎn)生差異,細(xì)胞增殖,在時間上同一細(xì)胞與其從前的狀態(tài)有所不同。細(xì)胞分化的本質(zhì)是基因組在時間和空間上的選擇性表達(dá),細(xì)胞系,通過不同基因表達(dá)的開啟或關(guān)閉,終產(chǎn)生標(biāo)志性蛋白質(zhì)。細(xì)胞誘導(dǎo)是指將一群不同類型或者形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征存在差異的細(xì)胞通過生物學(xué)、物理學(xué)等手段,將之轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂邢嗨?相同形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能特征的細(xì)胞群體的過程。
脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染
1、細(xì)胞H9C2 (Hela) 6孔板Hela1x10°/孔。
2、轉(zhuǎn)染前換上沒有抗sheng素的DMEM 胎清(10%)。
3、將質(zhì)粒DNA (約2-4ul) 2ul 加入dorf管中 DMEM至50u1。
4、脂質(zhì)體5ul補(bǔ)培養(yǎng)基至50ul混勻靜止5分鐘(質(zhì)粒與脂質(zhì)體比例為1:2或1.5:2.5)。
5、將含有脂質(zhì)體的培養(yǎng)基與含質(zhì)粒的混合總體積100ul室溫放置30分鐘。
6、吸取混合物均勻加入每一個孔中。
7、將6孔板放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)6小時后吸出培養(yǎng)基換上新配置的培養(yǎng)基DMEM6ml 胎清600u1 三抗300u1。
8、培養(yǎng)24小時。
流式細(xì)胞分選
流式細(xì)胞分選技術(shù)是利用流式細(xì)胞分選儀,細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),以高能量激光照射高速流動狀態(tài)下被熒光色素染色的單細(xì)胞或微粒,測量其產(chǎn)生的散射光和發(fā)射熒光的強(qiáng)度,從而對細(xì)胞(或微粒)的物理、生理、生化、免yi、遺傳、分子生物學(xué)性狀及功能狀態(tài)等進(jìn)行定性或定量檢測的--種現(xiàn)代細(xì)胞分析技術(shù),貴州細(xì)胞,它可根據(jù)發(fā)射光的熒光強(qiáng)度和波長將發(fā)光顆粒亞群分開并可實現(xiàn)單ke隆分選,能復(fù)雜樣本中的細(xì)胞進(jìn)行鑒定、分類、定量和分離,單次可同時對其中一種到四種特定細(xì)胞進(jìn)行超高速分選純化、高通量單分選或細(xì)胞芯片制備。分選后的細(xì)胞能直接用于培養(yǎng)、移植、核酸提取、單細(xì)胞PCR擴(kuò)增或原位雜交等,可進(jìn)一步進(jìn)行細(xì)胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同細(xì)胞之間的差異化研究。硬件中樣本細(xì)胞丟棄的比例低于5%,保證樣本中目標(biāo)細(xì)胞的高回收率。
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