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怎么知道您的細(xì)胞正遭受支原體摧殘呢,常見的檢測方法幾種:1.分離培養(yǎng)法,將疑樣本接種到支原體培養(yǎng)基中,觀察菌落生成。缺點:培養(yǎng)時間長,須3~5周才能判斷。2.DNA熒光染色法,快速轉(zhuǎn)膜液電話,利用熒光染劑 (Bisbenzimide, Hoechst 33258) 檢測支原體污染,但若有些細(xì)胞易有熒光背景,三明快速轉(zhuǎn)膜液,可能會干擾結(jié)果判讀。3.PCR法,利用特異性引物,經(jīng)PCR反應(yīng)檢測支原體DNA,靈敏且快速。BI EZ-PCR支原體檢測試劑盒:采用PCR法,簡化了細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的檢測過程,可檢測出細(xì)胞培養(yǎng)實驗中常見的支原體污染。
細(xì)胞培養(yǎng)時可能導(dǎo)致衰老的原因:1.細(xì)胞傳代次數(shù)比較多,一定要控制細(xì)胞傳代次數(shù)!大量擴(kuò)增細(xì)胞,將細(xì)胞進(jìn)行凍存,在必要的時候重新復(fù)蘇。2.胰酶消化時間太長,胰酶消化時間過長容易導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)不佳以及胞質(zhì)疏松;細(xì)胞傳代時需要留意胰酶消化的時間。消化過度,在消化細(xì)胞時會對細(xì)胞的表面蛋白有較強(qiáng)的損傷,所以消化的時間不能過長,建議使用合適濃度和pH值的消化酶,否則會導(dǎo)致細(xì)胞衰老和分化。
多肽具廣泛的溶解性。多肽不溶的主要問題是形成二級結(jié)構(gòu)。除了太肽外,這點都會發(fā)生, 在有多重疏水殘基的肽中更顯著。鹽會促進(jìn)二級結(jié)構(gòu)形成。我們建議先在無菌蒸餾水或去離子中溶解多肽。如需要增加溶解率, 可用超聲處理。溶解仍有問題,快速轉(zhuǎn)膜液批發(fā), 加少量稀氨水,快速轉(zhuǎn)膜液公司,會便于溶解。要長期保存多肽試劑, 應(yīng)該凍干燥,冷干粉可在-20℃或更低存放幾年而很少或無降解。溶液中的多肽遠(yuǎn)不穩(wěn)定。 多肽易受細(xì)菌降解,應(yīng)用無菌純化水溶解。
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