細(xì)胞培養(yǎng)后，需要對(duì)其生長(zhǎng)情況、形態(tài)甚至生物學(xué)性狀進(jìn)行觀察。由于細(xì)胞小而復(fù)雜，若不借助適當(dāng)?shù)氖侄?，難以觀察其形態(tài)、結(jié)構(gòu)，更難發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)各種組分的分子組成及功能。目前，已有多種研究細(xì)胞的技術(shù)，從光學(xué)顯微鏡到電子顯微鏡，從一般細(xì)胞化學(xué)法到免疫化學(xué)法。細(xì)胞染色是研究細(xì)胞生物學(xué)特征的一種常用手段，然而，對(duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)新手來(lái)說(shuō)，想要獲得一張漂亮的細(xì)胞染色圖并不容易。染色試劑不會(huì)選、細(xì)胞染色不均勻、染色時(shí)切片脫落等都是很常見(jiàn)的問(wèn)題。

細(xì)胞膜常用染料DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見(jiàn)的細(xì)胞膜染料（見(jiàn)表2），它們是一族親脂性的熒光染料，用于細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)研究。該系列染料進(jìn)入細(xì)胞膜后，會(huì)在整個(gè)細(xì)胞膜上側(cè)向擴(kuò)散，在比較好濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高，染色均一，熒光不易猝滅，無(wú)明顯細(xì)胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DiD已成功應(yīng)用于多種細(xì)胞的體內(nèi)示蹤研究，如Treg細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、造血干祖細(xì)胞等。 D-熒光素鉀鹽熒光染料。江蘇熒光染料流式細(xì)胞

FITC熒光標(biāo)記蛋白的應(yīng)用及特點(diǎn):活性熒光染料，如FITC、7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)、羅丹明B(RhodamineB)或AlexaFluor染料，可用于標(biāo)記抗體或蛋白質(zhì)功能基團(tuán)，生成分子探針，并通過(guò)熒光成像進(jìn)行檢測(cè)。當(dāng)用熒光染料化學(xué)標(biāo)記特異性抗體或其他純化生物分子時(shí)，它們成為用于檢測(cè)靶抗原或相互作用配偶體的熒光探針，用于細(xì)胞成像、流式細(xì)胞手術(shù)、蛋白質(zhì)痕跡和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)。由于熒光標(biāo)記物具有無(wú)放射物污染、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，在蛋白質(zhì)功能研究、藥物篩選等許多研究領(lǐng)域得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。

南京星葉生物科技有限公司Super Fluor 系列（效果同Alexa Fluor系列）

且Super Fluor活化酯（與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同） 湖北微泡熒光染料CY7.5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測(cè)和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。

注：建議對(duì)每只動(dòng)物模型都需要建立熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，從而確定比較高信號(hào)檢測(cè)時(shí)間和信號(hào)平臺(tái)期。保存和操作的過(guò)程中都要避光。另外水溶性儲(chǔ)存液過(guò)濾除菌后，可以-20℃或-80℃分裝凍存，避免反復(fù)凍融。如果有條件，對(duì)儲(chǔ)存液充氮?dú)饣驓鍤猓ǚ乐寡趸?，穩(wěn)定性和保存時(shí)間更長(zhǎng)。 注射方式，動(dòng)物類型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，因此建議每次實(shí)驗(yàn)都要做熒光素酶動(dòng)力學(xué)曲線，確定比較好信號(hào)平臺(tái)期和比較好的檢測(cè)時(shí)間。熒光素鉀鹽和熒光素鈉鹽應(yīng)用上沒(méi)有差別，兩者的差別在于物理性狀上如外形和溶解性。鈉鹽的水溶性高于鉀鹽。從目前發(fā)表的文獻(xiàn)來(lái)看，鉀鹽的使用率遠(yuǎn)高于鈉鹽，尤其是體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。兩者功效相同。 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

InvitrogenCy3染料是一種明亮的橙色熒光染料，可使用532nm激光線激發(fā)，并使用TRITC（四甲基羅丹明）濾光片組進(jìn)行可視化。除了免疫細(xì)胞化學(xué)應(yīng)用，Cy3染料通常用于標(biāo)記核酸。發(fā)光說(shuō)明：Cy3熒光團(tuán)也是親脂性神經(jīng)元和長(zhǎng)期DiI細(xì)胞追蹤試劑的基礎(chǔ)，該試劑添加烷基尾(≥12個(gè)碳）添加到**熒光團(tuán)上。Cy3染料是用于成像、流式細(xì)胞術(shù)和基因組應(yīng)用的蛋白質(zhì)和核酸結(jié)合物的傳統(tǒng)橙色熒光標(biāo)簽。它也是經(jīng)典親脂性示蹤劑DiI及其變體的基礎(chǔ)。根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)，Cy3可分為普通Cy3（常簡(jiǎn)稱Cy3）和磺化Cy3（Sulfo-Cy3）。Cy3水溶性較低，在水相標(biāo)記反應(yīng)時(shí)常常需要使用有機(jī)共溶劑，常用有機(jī)溶劑包括DMF，DMSO和乙腈等?；腔疌y3是在Cy3的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上磺化的產(chǎn)物，附帶2個(gè)或3個(gè)磺酸根離子。由于磺化效應(yīng)，磺化Cy3的亮度比Cy3稍亮，熒光穩(wěn)定性也提高，可賴受更長(zhǎng)時(shí)間的曝光。磺化Cy3水溶性極高，所以在標(biāo)記反應(yīng)中不需要使用有機(jī)共溶劑，特別適合標(biāo)記蛋白等對(duì)有機(jī)溶劑敏感的生物分子。另外磺化Cy3水溶性極好，并且染料分子本身帶電荷，標(biāo)記到蛋白表面后不會(huì)引發(fā)疏水性蛋白聚集，提高熒光標(biāo)記產(chǎn)物的穩(wěn)定性。當(dāng)然，磺化Cy3-NHS也可溶于甲醇，DMSO，DMF等有機(jī)溶劑，標(biāo)記反應(yīng)也可以在純有機(jī)溶劑中進(jìn)行。Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素?zé)晒馊玖稀?/p>

Cy5:激發(fā)波長(zhǎng)633/635nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)670nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL4通道檢測(cè);3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)同樣為小分子染料，非常適合需小分子染料的流式細(xì)胞術(shù)，熒光強(qiáng)度低于APC。5)與單核和粒細(xì)胞非特異性結(jié)合多，易出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

5、PE:激發(fā)波長(zhǎng)488nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)575nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氯離子激光器的流式細(xì)胞儀:2)在流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測(cè);3)其熒光泯滅性強(qiáng)，不適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù)，但適用于激光共聚焦顯微鏡技術(shù)。

6、PE-TR:激發(fā)波長(zhǎng)488nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)615nm。1)在BeckmanCoulter流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測(cè);2)可適用于小功率激光器的流式細(xì)胞儀，也可使用于大功率激光器的大流式細(xì)胞儀。

7、PE-AlexaFluor610:激發(fā)波長(zhǎng)488nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)628nm。1)在BeckmanCoulter流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測(cè);2)熒光強(qiáng)度高;3)可適用于小功率激光器的流式細(xì)胞儀，也可使用于大功率激光器的大流式細(xì)胞儀。 小動(dòng)物成像熒光染料是一種先進(jìn)的技術(shù)可以在小動(dòng)物體內(nèi)實(shí)時(shí)觀察和研究細(xì)胞、組織的功能和代謝過(guò)程。河北熒光染料Fluor 647

PI常用于細(xì)胞凋亡(apoptosis)或細(xì)胞壞死(necrosis)的檢測(cè)，常用于流式細(xì)胞儀分析。江蘇熒光染料流式細(xì)胞

選擇熒光染料時(shí)要考慮那些因素：激發(fā)波長(zhǎng)處的消光系數(shù)應(yīng)盡可能高：消光系數(shù)是衡量可以吸收多少光子的量度。量子產(chǎn)率應(yīng)該盡可能高：這是吸收光子與發(fā)射光子的比率。消光系數(shù)和量子產(chǎn)率的乘積就是亮度。熒光染料應(yīng)該是光穩(wěn)定的：遺憾的是，比較不同公司染料的光穩(wěn)定性的研究并不多。光致變色行為：對(duì)于STORM實(shí)驗(yàn)，您需要一個(gè)閃爍的熒光團(tuán)。但是，對(duì)于分子跟蹤實(shí)驗(yàn)，您***不想要閃爍的熒光團(tuán)?；?死細(xì)胞滲透性。您想要的反應(yīng)側(cè)基（例如HaloTag、抗體等）。當(dāng)您使用多個(gè)熒光探針時(shí)，尤其是當(dāng)您量化共定位時(shí)，請(qǐng)謹(jǐn)慎處理其他顏色通道中的滲色。單獨(dú)測(cè)試所有熒光探針以評(píng)估滲透。江蘇熒光染料流式細(xì)胞