為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術(shù)（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)，但使用熒光染料具有其獨特的優(yōu)勢。他們提供：高靈敏度：對于大多數(shù)分析物，熒光測量的靈敏度比吸光度測量高1000倍，即使在使用小樣本時也可以令人滿意地達(dá)到ppt（萬億分之一）的檢測限。寬線性動態(tài)范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數(shù)量眾多，分光光度測量通常會遇到干擾問題。在進(jìn)行熒光測量時不會遇到這個問題，因為只有少數(shù)材料具有熒光能力。高通量：熒光測量具有簡單而強(qiáng)大的協(xié)議，并且可以自動化用于高通量應(yīng)用。DAPI染色液（DAPI Staining Solution）常用于細(xì)胞核染色，可將細(xì)胞核染成藍(lán)色。湖北免疫組化熒光染料

羅丹明123一種可對活細(xì)胞線粒體染色的細(xì)胞染色試劑。羅丹明123可透過細(xì)胞膜且在活細(xì)胞的線粒體內(nèi)聚集，并發(fā)出黃綠色熒光。羅丹明123***用作檢測線粒體膜電位，也常用于細(xì)胞凋亡檢測。由于細(xì)胞內(nèi)ATP的量與羅丹明123的熒光強(qiáng)度之間有相關(guān)性，此熒光染料被應(yīng)用于檢測細(xì)胞內(nèi)的ATP。羅丹明123的比較大激發(fā)波長為507nm，比較大發(fā)射波長為525nm。在熒光顯微鏡下觀察，呈現(xiàn)黃綠色熒光。

一：工作液配制用緩沖液或者預(yù)熱的培養(yǎng)液直接稀釋儲存液到需要的工作液濃度（1～20μM），充分混勻。具體的工作液濃度使用者要根據(jù)自身實驗體系進(jìn)行調(diào)整?！咀⒁狻浚簩τ诩?xì)胞實驗，要控制好總體稀釋倍數(shù)，DMSO在培養(yǎng)液中的濃度不能超過0.1%，以避免DMSO對細(xì)胞的影響。

二：熒光顯微鏡觀察1、用載玻片準(zhǔn)備細(xì)胞。細(xì)胞數(shù)目應(yīng)為5×104～5×105個/mL。2、在載玻片上孵育細(xì)胞，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞。3、將Rhodamine123工作液加入載玻片并在37℃下孵育30min至1小時。4、去除Rhodamine123溶液并用培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞（洗滌細(xì)胞后如果要固定，加入10%福爾馬林緩沖液并孵育15～20min，接著用PBS洗滌）。5、熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。 吉林熒光染料綠色南京星葉生物科技有限公司Super Fluor系列（效果同Alexa Fluor 系列）。

南京星葉生物科技有限公司各類熒光染料

多肽、蛋白、抗體標(biāo)記：5(6)-FAM5(6)-FAM5-FAM6-FAM5(6)-FAM,SE5-FAM,SE6-FAM,SE5(6)-TAMRA5-TAMRA6-TAMRA5(6)-TAMRA,SE5-TAMRA,SE6-TAMRA,SE5-ROX6-ROX5-ROX,SE6-ROX,SE***成像：脂溶性熒光染料CY3NHSesterCY3amineCY3maleimideCY3azideCY3COOHCY3alkyneCY3hydrazideCY3ThiolCY5amineCY5NHSesterCY5maleimideCY5azideCY5COOHCY5alkyneCY5hydrazideCY5ThiolCY7amineCY7maleimideCY7azideCY7COOHCY7alkyneCY7hydrazideCY7Thiol水溶性熒光染料Sulfo-Cyanine3NHSesterSulfo-Cyanine3amineSulfo-CY3azideSulfo-CY3carboxylicacidSulfo-CY3alkyneSulfo-CY3hydrazideSulfo-CY3ThiolSulfo-Cyanine5NHSesterSulfo-Cyanine5amineSulfo-CY5azideSulfo-CY5carboxylicacidSulfo-CY5alkyneSulfo-CY5hydrazideSulfo-CY5ThiolCY7NHSesterSulfo-Cyanine7NHSesterSulfo-Cyanine7amineSulfo-CY7azideSulfo-CY7carboxylicacidSulfo-CY7alkyneSulfo-CY7hydrazideSulfo-CY7Thiol近紅外I區(qū)/II區(qū)熒光染料ICG-NHSesterICG-amineICG-maleimideICG-azideICG-COOHICG-alkyneICG-hydrazideICG-ThiolICG-TzICG-DBCO

常用抗體標(biāo)記熒光染料的特性及其應(yīng)用

1、FITC:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長525nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL1通道檢測;3)可用于熒光顯微鏡技術(shù)4)熒光強(qiáng)度易受PH值影響，PH值降低時其熒光強(qiáng)度減弱。2、AlexaFluor488:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長519nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀:2)在流式細(xì)胞儀的FL1通道檢測;3)具有超乎尋常的光穩(wěn)定性，非常適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)在較寬的PH值范圍內(nèi)保持穩(wěn)定(PH4~10)。5)南京星葉生物科技有限公司SuperFluor系列（效果同AlexaFluor系列）質(zhì)優(yōu)價廉，歡迎咨詢。3、Cy3:激發(fā)波長488nm，比較大發(fā)射波長570nm。1)其標(biāo)記的抗體適用于所有配備488nm氟離子激光器的流式細(xì)胞儀;2)在流式細(xì)胞儀的FL2通道檢測:3)適用于熒光顯微鏡技術(shù);4)為小分子染料，非常適合需小分子染料的流式細(xì)胞術(shù)，熒光強(qiáng)度低于PE。 PI常用于細(xì)胞凋亡(apoptosis)或細(xì)胞壞死(necrosis)的檢測，常用于流式細(xì)胞儀分析。

一、體外生物發(fā)光試驗熒光素試劑的制備：D-熒光素，鉀鹽，無菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配置）1、用無菌水制備100X熒光素原液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動至熒光素完全溶解。混勻后立即使用或分裝后-20℃凍存。2、將D-luciferin，potassiumsalt溶解于預(yù)熱好的組織培養(yǎng)基中制備成濃度為150μg/ml的工作液。用組織培養(yǎng)基1∶100稀釋儲存液，配置工作液(終濃度150μg/mL)3、去除培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基圖像分析前，向細(xì)胞培養(yǎng)板中添加1×熒光素工作液，然后進(jìn)行圖像分析-注射器濾膜過濾除菌，0.2μm注：成像前在37℃下對細(xì)胞進(jìn)行短時間孵育可增強(qiáng)信號。DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）對活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析。湖北免疫組化熒光染料

D-熒光素（D-Luciferin）是螢火熒光素酶底物，其量子效率為0.88，是Luminol的20倍。湖北免疫組化熒光染料

在熒光顯微術(shù)中，不僅蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)感興趣，而且對核酸也感興趣。有時有必要通過檢測細(xì)胞核來確定細(xì)胞的確切位置或數(shù)量。最常見的DNA染色劑之一是DAPI（4',6-二氨基-2-苯基吲哚），主要與DNA雙螺旋富含A-T的區(qū)域結(jié)合。與未結(jié)合態(tài)相比，DAPI在DNA上的熒光強(qiáng)度增加。染料被UV（紫外線）光激發(fā)，比較大激發(fā)波長為358nm。發(fā)射光譜較寬，峰值在461nm。弱熒光也可以檢測到RNA結(jié)合。在這種情況下，發(fā)射轉(zhuǎn)移到500nm。有趣的是，DAPI能夠滲透完整的細(xì)胞膜。因此，該染料既可用于固定細(xì)胞也可用于活細(xì)胞。湖北免疫組化熒光染料