羅丹明屬于呫噸族。與市場上的許多其他染料相比，羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性，使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們在聚合物納米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測、活細胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作：分子開關(guān)，病毒表面修飾，化學傳感器，硫醇。不同類型的染料通過它們各自的取代基（R1、R2、R3、R4和G）來區(qū)分。由于它們的差異，這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性（例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值）。氨基被剛性化的羅丹明染料無論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率，而在每個氮處具有兩個烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)部轉(zhuǎn)化，量子產(chǎn)率和熒光壽命隨溫度的變化而變化。羅丹明101和羅丹明B是一些**常用的羅丹明染料具有以下特點：--羧基傾向于在酸性溶液中質(zhì)子化--染料轉(zhuǎn)化為兩性離子堿性溶液--兩性離子染料在極性較小的有機溶劑中變?yōu)闊o色內(nèi)酯要將羅丹明用作熒光探針，必須對其進行修改。這可以通過(thexanthenemoiety)氨基、羧基苯基環(huán)或羧酸基團的修飾來實現(xiàn)。與TRITC一樣，羅丹明(NHS-rhodamine)的熒光特性為544nm（比較大吸收波長）和576nm（比較大發(fā)射）。Super Flour 系列在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等熒光染料。湖北石家莊熒光染料

其他細胞結(jié)構(gòu)常用染料生物染料在細胞結(jié)構(gòu)和組分鑒定中有著廣泛的應用，除細胞膜研究外，我們經(jīng)常也會對一些其它細胞結(jié)構(gòu)及成分進行探索，例如線粒體、溶酶體、蛋白質(zhì)、細胞核等，而對于不同的細胞結(jié)構(gòu)有不同的染料進行染色細胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液（DAPIStainingSolution）常用于細胞核染色，可將細胞核染成藍色。鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是細胞骨架的染色神器，羅丹明標記的Phalloidin（TRITC-Phalloidin）可將細胞染成橙紅色，DAPI與Phalloidin染色液是研究細胞形態(tài)變化時經(jīng)常用到的兩種共染的試劑，染色效果可見A1-E1用TRITC-鬼筆環(huán)肽（橙紅）染色的細胞骨架免疫熒光圖；A2-E2用DAPI（藍色）染色的細胞核免疫熒光圖；A3-E3合并的L929細胞免疫熒光染色圖。是S100A16過表達或下調(diào)前后PDAC細胞形態(tài)的變化。陜西熒光染料熒光素鉀鹽Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素熒光染料。

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當與細胞膜結(jié)合后其熒光強度**增強，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對細胞染色，這類染料在整個細胞膜上擴散，比較好濃度時可以使整個細胞膜染色。它們的熒光顏**分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來對活細胞進行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標準的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長的激發(fā)波長和發(fā)射波長，在細胞和組織染色中更有價值。 DiR的紅外熒光可以穿透細胞和組織，在***成像中用來示蹤。

三、流式細胞儀分析1、取對數(shù)生長期的細胞，接種到孔板，過夜培養(yǎng)。2、如果要進行藥物刺激，在細胞中加入感興趣的藥物進行干預，繼續(xù)培養(yǎng)一定時間后，收集細胞，PBS清洗2次。3、加入Rhodamine123工作液重懸細胞，37℃避光孵育15min或更長時間?！咀⒁狻浚河捎诩毎N類和實驗體系不同，Rhodamine123工作液濃度和孵育時間可以根據(jù)預實驗或參考文獻自行調(diào)整。4、用流式細胞儀檢測。

四、實驗案例1、取對數(shù)生長期A549細胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培養(yǎng)基）,37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)4-24h待其貼壁，以便后續(xù)實驗操作.2、棄掉培養(yǎng)液，PBS洗滌兩次.3、用培養(yǎng)基（無血清）稀釋Rh123母液制備1～20μMRh123工作液。具體工作濃度取決于細胞類型和細胞濃度。4、將Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育30分鐘.5、去除Rh123工作液并用PBS洗滌三次細胞去除背景色.6、熒光顯微鏡觀察. 小動物成像熒光染料能夠選擇性地與目標細胞或組織結(jié)合。

所需的CY3-NHS酯的量取決于待標記蛋白的量，以及CY3-NHS的比較好摩爾比為10。示例：假設(shè)所需的標記蛋白為500μL2mg/mLIgG(MW=150,000)，用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯，得到所需的CY3-NHS酯體積為5.05μL，詳細計算過程如下：1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150，000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3-NHS酯)×MW(CY3-NHS酯)/mg/μL(CY3-NHS酯)=6.7×10-5mmol×753.88mg/mmol/0.01mg/μL=5.05μL(CY3-NHS酯)4.運行偶聯(lián)反應1)將室溫新鮮制備的10mg/mLCY3-NHS酯緩慢加入到0.5mL蛋白質(zhì)樣品中于溶液中，輕輕搖動混勻，然后短暫離心，將樣品收集于反應管底部。請勿混勻，否則2)將反應管安置避光處，在接下來的間隔輕輕蛋白水解60分鐘。10-15分鐘，輕輕翻轉(zhuǎn)幾次以充分混合5.偶聯(lián)偶聯(lián)物以下方案是使用SepHadexG-25柱封閉染料-偶聯(lián)偶聯(lián)物的范例。1)根據(jù)制造說明準備SepHadexG-25柱。2)將反應混合物(來自“Runconjugationreaction”)加載到SepHadexG-25柱的頂部。3)一旦樣品在頂部樹脂表面下方運行，立即添加PBS(pH7.2-7.4)。4)向所需樣品添加更多PBS(pH7.2-7.4)即可完成柱密封。D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產(chǎn)生典型的黃綠色光。湖北石家莊熒光染料

吲哚菁綠（Indocyanine Green，簡稱ICG）是一種廣泛應用于醫(yī)學和生物領(lǐng)域的熒光染料。湖北石家莊熒光染料

Hoechst33342是一種可透過細胞膜并對DNA染色的細胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放強烈的藍色熒光。Hoechst33342常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。Hoechst33342-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長分別為350nm和460nm?？扇苡谒?。4.染色程序：（1）用PBS或合適的緩沖液制備10～50μMHoechst33342染料。（2）將1/10細胞培養(yǎng)基體積的Hoechst染料溶液加入細胞培養(yǎng)物中（可以用1/10濃度的Hoechst染料緩沖液代替培養(yǎng)基）。（3）在37℃培養(yǎng)細胞10～20分鐘。（4）用PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。（5）用帶有350nm激發(fā)波長，460nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。湖北石家莊熒光染料