PI是一種可對DNA染色的細胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。常用于細胞凋亡(apoptosis)或細胞壞死(necrosis)的檢測，常用于流式細胞儀分析。盡管PI不能通過活細胞膜，但卻能穿過破損的細胞膜而對核染色。PI經(jīng)常被用來與Calcein,AM、Hoechst33258或Hoechst33342等一起使用，能同時對活細胞和死細胞染色。PI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長分別為535nm和615nm。2.染色過程（1）將1/10培養(yǎng)基體積的PI染色液加入到細胞培養(yǎng)基中（也可以用1/10濃度的PI緩沖液代替培養(yǎng)基）。（2）在37℃培養(yǎng)細胞10～20分鐘。（3）用PBS或合適的緩沖液洗滌細胞兩次。（4）用535nm激發(fā)波長，615nm發(fā)射波長的濾光器的熒光顯微鏡觀察細胞。儲存條件：-20℃干燥避光保存，有效期一年。注意事項：PI對人體有刺激性，請注意適當(dāng)防護。Super Flour 系列在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3, Cy5, Cy5.5, Cy7等熒光染料。安徽熒光染料Fluor 647

使用螢火蟲熒光素酶（Fluc）作為報告基因和 D-熒光素作為底物的生物發(fā)光成像（BLI）是目前應(yīng)用*****的技術(shù)。將總信號強度相對于 D-熒光素注射后的時間進行繪制，以生成時間-強度曲線。除了峰值信號外，還確定注射 D-熒光素后固定時間點（5、10、15 和 20 分鐘）的信號作為峰值信號的替代。給定時間-強度曲線中的信號針對曲線中的峰值信號進行歸一化，以表示 D-熒光素注射后時間變化的模式[3]。每克體重注射 10 μL D-熒光素（腹膜內(nèi)或靜脈注射）儲備液：對于 20 g 小鼠，標(biāo)準(zhǔn) 150 mg/kg 注射通常約為 200 μL。在室溫下解凍 D-熒光素（鉀鹽或鈉鹽）并溶解在 dPBS（不含鈣或鎂）中，**終濃度為 15 mg/mL。通過吸取 5-10 mL 無菌水來預(yù)濕 0.22 μm 過濾器。安徽熒光染料Fluor 647花青類熒光染料屬于共振染料，其特征在于具有離域電荷的氮原子（兩個氮原子）之間的聚甲炔染料。

蛋白熒光標(biāo)記技術(shù)是目前**為常見的蛋白體外標(biāo)記技術(shù)，利用級聯(lián)放大反應(yīng)原理，將極度敏感性且易于檢測的熒光素通過某個基團吸附或共價結(jié)合后，標(biāo)記到特異性抗原或抗體分子上，應(yīng)用熒光顯微鏡觀察熒光標(biāo)記物因增強放大效應(yīng)而產(chǎn)生顏色、光譜等變化，以分析示蹤相應(yīng)抗體或抗原性質(zhì)與含量的方法。該技術(shù)在具有高度精確性的熒光顯微鏡下，借助高度靈敏性的熒光檢測，在各種生物過程中對目的蛋白進行可視化，從而通過抗原抗體高度特異性免疫定量表達或在細胞研究中定位。蛋白熒光標(biāo)記已成為研究蛋白質(zhì)互作、酶活性、***示蹤以及細胞分選重要工具。蛋白標(biāo)記常用熒光染料隨著蛋白熒光標(biāo)記技術(shù)不斷發(fā)展，各類熒光素廣泛應(yīng)用于生物實驗中，目前常用標(biāo)記蛋白/抗體的熒光素主要有BODIPY類、香豆素類、羅丹明類、近紅外類、NBD胺類以及菁染料等。南京星葉生物科技有限公司提供多種性價比高的各類活化熒光素，其熒光染料覆蓋波長范圍從350nm到790nm，例如Cy系列、SuperFluor系列（效果同AlexaFluor系列）等，用于標(biāo)記抗體、多肽以及蛋白功能基團，繼而生成分子探針，通過熒光成像進行相應(yīng)檢測。

羅丹明屬于呫噸族。與市場上的許多其他染料相比，羅丹明具有出色的光穩(wěn)定性以及許多光物理特性，使其非常適合用作激光染料、熒光探針和顏料。它們在聚合物納米粒子表面的表征、聚合物-生物偶聯(lián)物的檢測、活細胞的成像以及寡核苷酸在膠乳上的吸附分析等方面特別有用。羅丹明熒光染料的衍生物也用作：分子開關(guān)，病毒表面修飾，化學(xué)傳感器，硫醇。不同類型的染料通過它們各自的取代基（R1、R2、R3、R4和G）來區(qū)分。由于它們的差異，這些熒光染料在溶液中也表現(xiàn)出不同的光物理特性（例如不同的熒光壽命和發(fā)射比較大值）。氨基被剛性化的羅丹明染料無論溫度范圍如何都表現(xiàn)出高量子產(chǎn)率，而在每個氮處具有兩個烷基取代基的那些表現(xiàn)出活化的內(nèi)部轉(zhuǎn)化，量子產(chǎn)率和熒光壽命隨溫度的變化而變化。羅丹明101和羅丹明B是一些**常用的羅丹明染料具有以下特點：--羧基傾向于在酸性溶液中質(zhì)子化--染料轉(zhuǎn)化為兩性離子堿性溶液--兩性離子染料在極性較小的有機溶劑中變?yōu)闊o色內(nèi)酯要將羅丹明用作熒光探針，必須對其進行修改。這可以通過(thexanthenemoiety)氨基、羧基苯基環(huán)或羧酸基團的修飾來實現(xiàn)。與TRITC一樣，羅丹明(NHS-rhodamine)的熒光特性為544nm（比較大吸收波長）和576nm（比較大發(fā)射）。Super Fluor 680（效果同Alexa Fluor 680）琥珀酰亞胺酯熒光染料。

所需的CY3-NHS酯的量取決于待標(biāo)記蛋白的量，以及CY3-NHS的比較好摩爾比為10。示例：假設(shè)所需的標(biāo)記蛋白為500μL2mg/mLIgG(MW=150,000)，用100μLDMSO溶解1mgCY3-NHS酯，得到所需的CY3-NHS酯體積為5.05μL，詳細計算過程如下：1)mmol(IgG)=mg/mL(IgG)×mL(IgG)/MW(IgG)=2mg/mL×0.5mL/150，000mg/mmol=6.7×10-6mmol2)mmol(CY3-NHS酯)=mmol(IgG)×10=6.7×10-6mmol×10=6.7×10-5mmol3)uL(CY3-NHS酯)=mmol(CY3-NHS酯)×MW(CY3-NHS酯)/mg/μL(CY3-NHS酯)=6.7×10-5mmol×753.88mg/mmol/0.01mg/μL=5.05μL(CY3-NHS酯)4.運行偶聯(lián)反應(yīng)1)將室溫新鮮制備的10mg/mLCY3-NHS酯緩慢加入到0.5mL蛋白質(zhì)樣品中于溶液中，輕輕搖動混勻，然后短暫離心，將樣品收集于反應(yīng)管底部。請勿混勻，否則2)將反應(yīng)管安置避光處，在接下來的間隔輕輕蛋白水解60分鐘。10-15分鐘，輕輕翻轉(zhuǎn)幾次以充分混合5.偶聯(lián)偶聯(lián)物以下方案是使用SepHadexG-25柱封閉染料-偶聯(lián)偶聯(lián)物的范例。1)根據(jù)制造說明準(zhǔn)備SepHadexG-25柱。2)將反應(yīng)混合物(來自“Runconjugationreaction”)加載到SepHadexG-25柱的頂部。3)一旦樣品在頂部樹脂表面下方運行，立即添加PBS(pH7.2-7.4)。4)向所需樣品添加更多PBS(pH7.2-7.4)即可完成柱密封。D-熒光素鉀鹽熒光染料。四川武漢熒光染料

DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）對活細胞進行多色成像和流式分析。安徽熒光染料Fluor 647

三：貼壁細胞染色1、將貼壁細胞培養(yǎng)于無菌蓋玻片上。2、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，但要使表面保持濕潤。3、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞。4、37℃孵育細胞2~20min，不同的細胞比較好培養(yǎng)時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。5、吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2~3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細胞，孵育5~10min，然后吸干培養(yǎng)基。但要使表面保持濕潤。四：結(jié)果檢測樣品可在培養(yǎng)基中進行檢測，可通過熒光顯微鏡成像或流式細胞儀分析。安徽熒光染料Fluor 647