在選擇合適的小RNA分子進(jìn)行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應(yīng)先確定其實(shí)驗(yàn)需要。例如，siRNA*對(duì)一個(gè)靶標(biāo)具有高度特異性，而miRNA具有調(diào)節(jié)多個(gè)下游靶標(biāo)的潛力。如今，可以人工合成各種類型的短長(zhǎng)度寡核苷酸來(lái)模仿小RNA分子，以研究這些小RNA分子的敲入/敲入/敲出效應(yīng)。常用的寡核苷酸可分為模擬物或拮抗劑。模擬物是一種基于rna的小寡核苷酸(可能是piRNA、miRNA或siRNA)，其結(jié)構(gòu)使其能夠與目標(biāo)mRNA結(jié)合以抑制其功能，從而導(dǎo)致特定基因的翻譯抑制。相反，拮抗劑是一種寡核苷酸，它將與互補(bǔ)的小RNA鏈(如miRNA)結(jié)合以拮抗其活性，從而增加目標(biāo)基因的表達(dá)。脂質(zhì)復(fù)合物(CLNACs)通過(guò)網(wǎng)格蛋白參與的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。重慶fugene轉(zhuǎn)染試劑

流式細(xì)胞術(shù)可以更精確地定量表達(dá)特定熒光基因的細(xì)胞，以評(píng)估轉(zhuǎn)染效率。另一種評(píng)估轉(zhuǎn)染效率的方法是通過(guò)監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染后的特定蛋白表達(dá)。將轉(zhuǎn)基因引入細(xì)胞可能會(huì)改變由轉(zhuǎn)基因或細(xì)胞中其他基因編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)。同樣，轉(zhuǎn)染小RNA也可以調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞中特定下游遺傳靶點(diǎn)的表達(dá)。免疫印跡和免疫熒光染色可用于評(píng)估轉(zhuǎn)染后蛋白表達(dá)的變化。在這兩種方法中，使用特異性抗體結(jié)合靶蛋白是至關(guān)重要的，后者需要使用與一抗結(jié)合的熒光標(biāo)記二級(jí)抗體來(lái)檢測(cè)感興趣的蛋白質(zhì)。另一方面，在免疫印跡中，可以使用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)偶聯(lián)的二抗與一抗結(jié)合，進(jìn)行特異性蛋白檢測(cè)。免疫印跡法允許對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)進(jìn)行半定量，而免疫熒光染色法允許通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行定量檢測(cè)。通過(guò)檢查特定蛋白表達(dá)來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效率更具可重復(fù)性和直接性。然而，使用抗體所固有的非特異性蛋白質(zhì)結(jié)合問(wèn)題和獲得假陰性結(jié)果的可能性，這可能是由于不及時(shí)測(cè)定蛋白質(zhì)表達(dá)引起的，仍然是使用這些方法的缺點(diǎn)。湖北轉(zhuǎn)染試劑性價(jià)比高轉(zhuǎn)染是將外來(lái)核酸傳遞到真核細(xì)胞中以修飾宿主細(xì)胞的遺傳組成的過(guò)程。

Severinoetal.進(jìn)行的研究也指出了陽(yáng)離子脂質(zhì)作為基因遞送納米載體的潛在毒性。他們成功實(shí)現(xiàn)了人動(dòng)力蛋白的表達(dá)，但也證明了較高濃度的SLN仍然具有細(xì)胞毒性，并導(dǎo)致活細(xì)胞數(shù)量減少。另一組比較了DNA/DOTAP復(fù)合物和由魚(yú)精蛋白、DNA和脂質(zhì)層組成的納米顆粒在不同細(xì)胞系上的轉(zhuǎn)染效率:CHO(中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞)、HEK293(人胚胎腎細(xì)胞)、NIH3T3(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)和A17(小鼠*細(xì)胞)。魚(yú)精蛋白/DNA/脂質(zhì)納米顆粒在每種細(xì)胞系中更有效地實(shí)現(xiàn)綠色和紅色熒光蛋白的表達(dá)，即使不同細(xì)胞系對(duì)轉(zhuǎn)染的敏感性不同。陽(yáng)離子脂質(zhì)的毒性作用使我們必須尋找另一種能夠取代它們的化合物。不同的β-氨基酯聚合物作為納米載體，成功地將hESC(人類胚胎干細(xì)胞)的轉(zhuǎn)染效率提高了四倍，同時(shí)保持較低的細(xì)胞毒性。這給我們帶來(lái)了希望，納米顆粒能夠與具有所需官能團(tuán)的其他化合物的必要添加一起形成***有效的核酸遞送平臺(tái)。

基于非病毒的轉(zhuǎn)染方法可以進(jìn)一步分為物理/機(jī)械方法和化學(xué)方法。常用的物理/機(jī)械轉(zhuǎn)染方法包括電穿孔、聲孔、磁***、基因顯微注射和激光照射。電穿孔是一種常用的物理轉(zhuǎn)染方法，利用電壓瞬間增加細(xì)胞膜通透性，允許外來(lái)核酸進(jìn)入。這種方法通常用于轉(zhuǎn)染原代細(xì)胞、干細(xì)胞和B細(xì)胞系等難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。然而，使用高壓可能導(dǎo)致細(xì)胞壞死、凋亡和長(zhǎng)久性細(xì)胞損傷。超聲輔助轉(zhuǎn)染或超聲穿孔涉及使用微泡技術(shù)在細(xì)胞膜上制造孔，以減輕遺傳物質(zhì)的轉(zhuǎn)移，而激光照射輔助轉(zhuǎn)染使用激光束在質(zhì)膜上制造小孔，允許外來(lái)遺傳物質(zhì)進(jìn)入。與電穿孔一樣，超聲穿孔和激光輔助轉(zhuǎn)染也有破壞細(xì)胞膜和不可逆細(xì)胞死亡的風(fēng)險(xiǎn)。相比之下，磁輔助轉(zhuǎn)染，或使用磁力來(lái)幫助轉(zhuǎn)移外來(lái)遺傳物質(zhì)的磁轉(zhuǎn)染，似乎對(duì)生物的破壞性較盡管效率較低，但對(duì)宿主細(xì)胞的破壞較小。另一方面，基因顯微注射涉及使用特定的針刺穿細(xì)胞，將所需的核酸注射到宿主細(xì)胞的細(xì)胞核中。然而，這項(xiàng)技術(shù)需要經(jīng)過(guò)專門訓(xùn)練的人員或機(jī)器人系統(tǒng)，他們可以高精度地執(zhí)行程序，以防止細(xì)胞損傷，因此在基因***等臨床應(yīng)用中具有重要價(jià)值。與物理或機(jī)械轉(zhuǎn)染方法相比，化學(xué)轉(zhuǎn)染涉及使用專門設(shè)計(jì)的化學(xué)品或化合物來(lái)幫助將外源核酸轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中。由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場(chǎng)變革。

脂質(zhì)復(fù)合物(CLNACs)通過(guò)網(wǎng)格蛋白參與的內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞，并被困在核內(nèi)小體中，從這些囊泡結(jié)構(gòu)中釋放出來(lái)，進(jìn)入核周區(qū)域，***進(jìn)入細(xì)胞核。內(nèi)吞作用在一定程度上取決于脂質(zhì)體載體的物理化學(xué)性質(zhì)。Friend和同事描述了可能由脂質(zhì)體與核膜融合而形成的囊泡和網(wǎng)狀核內(nèi)膜。**近有研究表明，很大一部分從核內(nèi)體釋放到細(xì)胞質(zhì)質(zhì)的質(zhì)粒由于與細(xì)胞質(zhì)中的大離子凝聚劑結(jié)合而失去活性。這可能解釋了脂質(zhì)轉(zhuǎn)染所觀察到的低且可變的轉(zhuǎn)染率。雖然這些脂質(zhì)載體從細(xì)胞外部到細(xì)胞核的路徑尚未完全確定，但核酸能夠產(chǎn)生其效果本身就是一項(xiàng)驚人的壯舉。至少對(duì)于質(zhì)粒而言，較小的結(jié)構(gòu)體比較大的質(zhì)粒具有更高的轉(zhuǎn)染率。核酸外排，雖然不是常見(jiàn)的報(bào)道，但也被證明會(huì)發(fā)生。在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細(xì)菌DNA中的頻率相似。湖北轉(zhuǎn)染試劑性價(jià)比高

不同種類的納米顆粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞系后，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。重慶fugene轉(zhuǎn)染試劑

化學(xué)轉(zhuǎn)染的效率在很大程度上取決于幾個(gè)因素，如使用的試劑類型、靶細(xì)胞的來(lái)源和性質(zhì)，以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸，并將其靶標(biāo)傳遞給非分裂細(xì)胞和分裂細(xì)胞，因此在基因***中非常有用。有幾個(gè)因素已被證明可能影響病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)的效率，如靶細(xì)胞類型、使用的啟動(dòng)子類型、載體濃度和使用的轉(zhuǎn)導(dǎo)介質(zhì)條件。在一項(xiàng)評(píng)估使用人類免疫缺陷病毒(HIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)進(jìn)行基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的體外研究中，觀察到這兩種病毒在來(lái)自人類、倉(cāng)鼠、貓、狗、馬和豬的不同細(xì)胞系上的不同程度的效率。在大多數(shù)細(xì)胞類型上，使用HIV的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率普遍優(yōu)于EIAV，而這兩種病毒對(duì)嚙齒動(dòng)物細(xì)胞的***性較弱。在同一項(xiàng)研究中，啟動(dòng)子的類型也被認(rèn)為是可能影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的一個(gè)因素，因此含有替代CMV啟動(dòng)子的內(nèi)部啟動(dòng)子EF-1a的HIV在小鼠和大鼠細(xì)胞上表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。重慶fugene轉(zhuǎn)染試劑