基因遞送用脂質(zhì)體隨著科學(xué)技術(shù)的進步，與人類基因組及其在疾病***中的應(yīng)用相關(guān)的各種發(fā)現(xiàn)變得更加觸手可及。盡管有了這些發(fā)展，選擇一個合適的載體將基因傳遞到目標是至關(guān)重要的。其中一種重要的載體是脂質(zhì)體，它可以將DNA、反義寡核苷酸、siRNA和其他潛在的藥物輸送到細胞核中。專門設(shè)計的脂質(zhì)體如陽離子脂質(zhì)體、pH敏感脂質(zhì)體、融合性脂質(zhì)體和基因體被用于基因遞送研究。由于DNA帶有強烈的負電荷，因此轉(zhuǎn)染細胞變得非常困難。DNA進入細胞核可以用不同的方法進行。它們大致可分為物理、化學(xué)、生物和機械。使用脂質(zhì)體傳遞DNA屬于化學(xué)范疇。陽離子脂質(zhì)體作為DNA轉(zhuǎn)染載體已顯示出良好的效果。然而，可以觀察到，轉(zhuǎn)染效果比較好的脂質(zhì)有三個主要成分:帶正電荷的頭基團與帶負電荷的DNA相互作用，決定脂質(zhì)溶解度的連接基團和有助于將脂質(zhì)錨定在雙分子層上的疏水性基團。脂質(zhì)DNA絡(luò)合是由于脂質(zhì)表面的陽離子電荷使DNA靜電吸附而形成的。內(nèi)容物的遞送可能歸因于陽離子脂質(zhì)體的膜融合，同時避免了核仁和溶酶體對DNA的降解。脂質(zhì)體的大小是res***的重要決定因素。在這方面，當脂質(zhì)體用于基因遞送時，內(nèi)皮細胞的通過是***道屏障?；蜣D(zhuǎn)移**重要的靶***是肝臟。LNP載體是核酸類藥物的成功載體之一。河北脂質(zhì)體載藥設(shè)計

兩者都含有一種可電離的脂質(zhì)，在低pH值下帶正電荷(使RNA絡(luò)合)，在生理pH值下為中性(減少潛在的毒性作用并促進有效載荷釋放)。它們還含有聚乙二醇化脂質(zhì)，以減少血清蛋白的抗體結(jié)合(調(diào)理)和吞噬細胞的***，從而延長體循環(huán)。輝瑞公司的陽離子脂質(zhì):peg脂質(zhì):膽固醇:DSPC的摩爾比為(43:1.6:47:9.4)，莫當納疫苗的摩爾比為(50:1.5:38.5:10)。這些納米顆粒直徑為80 - 100納米，每個脂質(zhì)納米顆粒含有大約100個mRNA分子。ALC-0315(輝瑞)和SM-102 (Moderna)這兩種脂質(zhì)都是叔胺，在低ph下質(zhì)子化(因此帶正電荷)。它們的碳氫鏈通過可生物降解的酯基連接，在mRNA傳遞后能夠安全***。mRNA疫苗中使用的陽離子脂質(zhì)含有支鏈烴鏈，這優(yōu)化了非層狀相的形成和mRNA的遞送效率。peg -脂質(zhì)均為PEG-2000偶聯(lián)物。LNPs是在低pH (pH 4.0)條件下制備的，在這種條件下，可電離的脂質(zhì)帶正電，因此它很容易與mRNA形成復(fù)合物。微流控裝置用于將水中含有mRNA的流與乙醇中含有脂質(zhì)混合物的流混合。當快速混合時，這兩種流的成分形成納米顆粒，捕獲帶負電荷的mRNA。河北脂質(zhì)體載藥設(shè)計脂質(zhì)體是由多種組分構(gòu)成的，主要包括：磷脂質(zhì)、膽固醇、表面活性劑和PEG2000等。

在各種類型的脂質(zhì)體中，免疫脂質(zhì)體因其靶向能力而受到***關(guān)注。 由于存在附著在其表面的抗體，這些脂質(zhì)體表現(xiàn)出免疫應(yīng)答。免疫脂質(zhì)體的制備， 即抗體與脂質(zhì)體的偶聯(lián)，并不是那么簡單， 甚至在其配方過程中可能會帶來挑戰(zhàn)。 蛋白質(zhì)分子和單克隆抗體可以直接偶聯(lián)到脂質(zhì)體、聚乙二醇化脂質(zhì)體或聚乙二醇化脂質(zhì)體的聚乙二醇鏈上。與其他脂質(zhì)體類似，RES可以***和***體循環(huán)中的免疫脂質(zhì)體快速***。 因此，為了防止攝取和增加循環(huán)半衰期， 脂質(zhì)體被聚乙二醇化(涂有聚乙二醇)。 類似地， 抗體結(jié)合到聚乙二醇化脂質(zhì)體上也有報道。然而， 這種遞送系統(tǒng)的缺點是很難將抗體偶聯(lián)到聚乙二醇化脂質(zhì)體上， 因為高分子量的聚乙二醇鏈會對抗體結(jié)合到脂質(zhì)體上造成空間位阻。此外， 結(jié)合抗體的靶向能力也因聚乙二醇的存在而降低。 為了克服這些問題， 并利用抗體偶聯(lián)到 聚乙二醇化脂質(zhì)體的聚乙二醇鏈上， 以達到期望的靶向目的。

siRNA脂質(zhì)體

RNA干擾(RNAi)途徑允許siRNA和miRNAs負向調(diào)節(jié)蛋白表達。siRNA是21～23對核苷酸組成的雙鏈RNA，可誘導(dǎo)同源靶mRNA沉默。為了發(fā)揮作用，雙鏈siRNA分裂成兩個單鏈RNA:乘客鏈和引導(dǎo)鏈。乘客鏈被argonaute-2蛋白降解,而引導(dǎo)鏈則被納入RNAi誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體中，該復(fù)合體結(jié)合與引導(dǎo)鏈互補的mRNA并將其切割。siRNA似乎具有***多種疾病的巨大潛力，因為它們可以很容易地下調(diào)各種靶mRNA，而不考慮它們的位置(即在細胞核或細胞質(zhì)中)，并且它們的特異性結(jié)合表明它們比傳統(tǒng)化學(xué)藥物誘導(dǎo)的副作用更少。作為一種新型的基于核酸的***策略，siRNA***與傳統(tǒng)的化學(xué)藥物相比具有許多優(yōu)勢。然而，為了促進基于siRNA的***方法的發(fā)展，必須克服一些挑戰(zhàn)，包括需要識別適當?shù)陌谢蚝烷_發(fā)優(yōu)化的遞送系統(tǒng)。許多研究人員試圖利用陽離子脂質(zhì)體提高siRNA的細胞遞送和基因沉默效率。例如，由DC-6-14、DOPE和膽固醇組成的陽離子脂質(zhì)體被用于遞送螢火蟲熒光素酶特異性的siRNA。當陽離子脂質(zhì)體與siRNA持續(xù)劇烈攪拌混合時，轉(zhuǎn)染效率提高，說明將siRNA加載到陽離子脂質(zhì)體上的方法可以調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)染效率。siRNA脂叢的***應(yīng)用因靶蛋白而異。 脂質(zhì)體制備方法：二次乳化法。

載藥脂質(zhì)體如何純化如果需要純化載藥脂質(zhì)體，通常會根據(jù)載藥脂質(zhì)體的性質(zhì)和所需純度要求選擇合適的純化方法。以下是一些可能的純化方法：1.超濾法：超濾可以用于去除較大的雜質(zhì)和未包埋的藥物。通過選擇適當?shù)姆肿恿拷刂鼓?，將載藥脂質(zhì)體溶液經(jīng)過超濾膜，較大的雜質(zhì)和未包埋的藥物將被截留，而較小的載藥脂質(zhì)體顆粒則通過膜孔。2.凝膠過濾法：凝膠過濾可以利用凝膠材料的孔隙大小分離分子。將載藥脂質(zhì)體溶液加入到凝膠柱中，通過洗脫的方式，較小的載藥脂質(zhì)體顆粒會通過凝膠柱，而較大的雜質(zhì)則會被截留在柱中。3.離心法：離心可以將載藥脂質(zhì)體顆粒沉淀到底部，去除上清液中的雜質(zhì)和未包埋的藥物。將載藥脂質(zhì)體溶液進行高速離心，使載藥脂質(zhì)體顆粒沉淀到離心管底部，然后去除上清液中的雜質(zhì)和未包埋的藥物。4.柱層析法：柱層析可以利用吸附劑對溶液中分子的親和性分離。將載藥脂質(zhì)體溶液通過填充有吸附劑的柱子，通過洗脫的方式，使載藥脂質(zhì)體顆粒和雜質(zhì)分離出來。5.其他方法：根據(jù)具體情況，還可以考慮其他純化方法，如凝膠電泳法等。選擇合適的純化方法需要考慮載藥脂質(zhì)體的性質(zhì)、所需純度要求以及純化效率等因素。通常會結(jié)合多種方法進行純化，以達到所需的純度和純凈度。脂質(zhì)與生物活性小分子(如葉酸)的結(jié)合已被研究用于靶向遞送核酸。河北脂質(zhì)體載藥設(shè)計

陽離子脂質(zhì)體遞送化藥和核酸的優(yōu)勢。河北脂質(zhì)體載藥設(shè)計

為了***免疫性疾病，將針對甘油醛3-磷酸脫氫酶(***DH)的siRNA與含1,2-dilinoleyl-4-(2-dimethylaminoethyl)-[1,3]-dioxolane、DSPC和膽固醇的陽離子脂質(zhì)體絡(luò)合。用該復(fù)合物(5mg/kgsiRNA)處理小鼠，4天后，腹腔巨噬細胞和樹突狀細胞的***DH表達量減少40%，脾源性抗原呈遞細胞的***DH表達量減少60%。在其他研究中，將重鏈鐵蛋白特異性siRNA與陽離子脂質(zhì)體結(jié)合，并局部給藥于荷U251細胞的人膠質(zhì)瘤小鼠。**內(nèi)注射鐵蛋白特異性siRNA與DC-Chol和DOPE組成的陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物，其抑制**生長的程度與卡莫司定(一種主要用于膠質(zhì)瘤***的DNA烷基化劑)相當。argonaute-2特異性siRNA已被證明可誘導(dǎo)細胞凋亡，使用由DC-6-14、DSPC、DOPE和DSPC-PEG2000組成陽離子脂質(zhì)體遞送argonaute-2特異性siRNA時發(fā)現(xiàn)，將這些復(fù)合物靜脈注射到接種Lewis肺*的小鼠體內(nèi)(每隔一天1mg/kg，共5次)，這些復(fù)合物可降低**組織中argonaute-2的表達，并***抑制**生長。河北脂質(zhì)體載藥設(shè)計