DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)。當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度**增強(qiáng)，這類染料有著很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。一旦對(duì)細(xì)胞染色，這類染料在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散，比較好濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。它們的熒光顏**分明顯：DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）和 DiR （深紅色熒光）這使得他們可以用來對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分別用標(biāo)準(zhǔn)的 FITC和TRITC的濾光片。DiD可以用 633 nm He–Ne 激光器激發(fā)，有著比DiI更長(zhǎng)的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，在細(xì)胞和組織染色中更有價(jià)值。 DiR的紅外熒光可以穿透細(xì)胞和組織，在***成像中用來示蹤。熒光染料可以單獨(dú)使用，也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。山東熒光染料DID

Cy7DiC18（DiR）是一個(gè)親脂性、近紅外熒光花青染料。這個(gè)染料常用于標(biāo)記細(xì)胞質(zhì)膜。Cy7DiC18（DiR）的兩個(gè)18-碳鏈插入到細(xì)胞膜，從而進(jìn)行特定的、穩(wěn)定的細(xì)胞染色，幾乎不會(huì)發(fā)生細(xì)胞間的染料轉(zhuǎn)移。Cy7DiC18（DiR）（近紅外熒光）和其他細(xì)胞膜熒光染料如DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）配合使用，為多色成像和流式細(xì)胞分析提供了有效的工具。Cy7DiC18（DiR）染色后可進(jìn)行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他試劑）的固定，但不建議在染色后進(jìn)行透化的過程。此外，在固定透化（室溫下用0.1%TritonX-100透化）后，也可以很好地進(jìn)行質(zhì)膜染色。

1、Cy7DiC18（DiR）染色固定的細(xì)胞或組織樣品時(shí)，通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進(jìn)行固定，使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?huì)導(dǎo)致熒光背景較高。

2、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 山東熒光染料DIDD-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產(chǎn)生典型的黃綠色光。

過標(biāo)記——計(jì)算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標(biāo)記的熒光團(tuán)大于10mol。雖然過標(biāo)記的蛋白也可以使用，但可能會(huì)引起蛋白的聚集、降低抗體結(jié)合抗原的特異性，這些都會(huì)造成非特異性結(jié)合。過標(biāo)記還會(huì)引起熒光淬滅?？梢栽黾拥鞍谆驕p少反應(yīng)時(shí)間。3．未結(jié)合染料難以去除——盡管大部分時(shí)候用分離柱可以較好的純化蛋白偶聯(lián)物，但仍可能會(huì)有痕量的游離染料留在偶聯(lián)物溶液中，會(huì)使標(biāo)記計(jì)算的值偏高?？捎梅蛛x柱再次分離或透析去除。4．蛋白或蛋白偶聯(lián)物無法洗脫——不要再加緩沖液，只需再次離心一次或幾次。

與花青和羅丹明染料一樣，熒光素也是一種有機(jī)染料。熒光素的比較大吸收波長(zhǎng)為494nm，比較大發(fā)射波長(zhǎng)為521nm（通常吸收藍(lán)色范圍內(nèi)的光并發(fā)射綠色范圍內(nèi)的光），熒光素是一種高熒光物質(zhì)。即使在非常少量的情況下也可以檢測(cè)到它，并且在與抗體結(jié)合時(shí)用于顯微鏡檢查。熒光素的衍生物包括異硫氰酸熒光素、俄勒岡綠和羧基萘并熒光素等。與許多其他熒光染料一樣，熒光素價(jià)格低廉且易于使用，使其成為生物學(xué)研究中很受歡迎的染料之一。與大多數(shù)其他染料不同，熒光素在水溶液中是無毒的。因此，它是極少數(shù)用作地下水示蹤劑的染料之一。Super Fluor活化酯（與Invitrogen的Alexa Fluor活化酯完全相同）。

SuperFluor活化酯（與Invitrogen的AlexaFluor活化酯完全相同）SuperFlour系列熒光探針，具有更強(qiáng)的熒光強(qiáng)度，更廣的pH應(yīng)用范圍（pH4～10）,更好的抗淬滅性。在生物熒光領(lǐng)域已逐漸替代FITC,Cy3,Cy5,Cy5.5,Cy7等熒光染料。1．標(biāo)記效率低——計(jì)算結(jié)果顯示每摩爾145,000MW的蛋白標(biāo)記的熒光團(tuán)少于4mol有以下原因：1）緩沖液中含有痕量伯銨成分，與染料反應(yīng)降低了標(biāo)記效率。如果蛋白已經(jīng)溶于含氨基的緩沖液（如Tris或氨基乙酸），標(biāo)記前用PBS透析。2）蛋白含量較低(≤1mg/mL)會(huì)影響標(biāo)記效率。3）標(biāo)記步驟中加入碳酸氫鈉的作用是將反應(yīng)混合物的pH升高至～8，因?yàn)樵谌鯄A性環(huán)境中標(biāo)記反應(yīng)的效率比較高。如果蛋白溶液的緩沖范圍在低pH，加入重碳酸鹽也無法將pH調(diào)節(jié)至**適水平。要么加大重碳酸鹽的量，要么將緩沖液換成PBS，或用0.1M碳酸氫鈉透析等。4）研究顯示pH升至9.0～9.4，標(biāo)記效率和標(biāo)記速度（只需10min）明顯改善。5）不同抗體與熒光團(tuán)的反應(yīng)速率不同，染料標(biāo)記后保留的生物活性程度也不同，因此標(biāo)準(zhǔn)步驟也不是總有比較好的標(biāo)記結(jié)果。為增加標(biāo)記率，可以對(duì)同一樣品進(jìn)行再標(biāo)記，或減少蛋白的量加大染料的量重新標(biāo)記。有研究者在室溫孵育1小時(shí)后再4℃孵育過夜，情況有所改善。生物發(fā)光是利用熒光素酶報(bào)告基因在體內(nèi)表達(dá)產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。北京熒光染料細(xì)胞核

小動(dòng)物成像熒光染料是一種先進(jìn)的技術(shù)可以在小動(dòng)物體內(nèi)實(shí)時(shí)觀察和研究細(xì)胞、組織的功能和代謝過程。山東熒光染料DID

Hoechst33342是一種可透過細(xì)胞膜并對(duì)DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，它在嵌入雙鏈DNA后釋放強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光。Hoechst33342常用于細(xì)胞凋亡檢測(cè)，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測(cè)。Hoechst33342-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)分別為350nm和460nm。可溶于水。4.染色程序：（1）用PBS或合適的緩沖液制備10～50μMHoechst33342染料。（2）將1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積的Hoechst染料溶液加入細(xì)胞培養(yǎng)物中（可以用1/10濃度的Hoechst染料緩沖液代替培養(yǎng)基）。（3）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10～20分鐘。（4）用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。（5）用帶有350nm激發(fā)波長(zhǎng)，460nm發(fā)射波長(zhǎng)的濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。山東熒光染料DID