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ELISA試劑盒的安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請(qǐng)盡快用水沖洗。
2. 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
4. 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
5. 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
6. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
7. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
ELISA試劑盒——會(huì)出現(xiàn)的問(wèn)題及解決辦法
標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不佳,或是平行性不好。
a.原因:溫育位置避光不好或受到氣流干擾。
解決辦法: 請(qǐng)確認(rèn)溫育位置既不透光也不透風(fēng)(如抽屜內(nèi))。
b.原因:操作時(shí)間拖太久。
解決辦法:請(qǐng)?jiān)诜椒ㄊ炀毢笤龠M(jìn)行操作。
c.原因:微孔間相互污染。
解決辦法: 加樣品時(shí),請(qǐng)小心勿濺出微孔外,以免造成其它微孔的污染。
d.原因:標(biāo)準(zhǔn)品或酶標(biāo)記物所加入的量不一致。
解決辦法:請(qǐng)使用已校正過(guò)的移液槍,并確保其與吸頭之間有高度密合性。
e.原因:添加樣品或試劑的操作方法不正確。
解決辦法:加樣品或試劑時(shí),吸頭請(qǐng)勿接觸微孔。
f.原因:洗板過(guò)程發(fā)生問(wèn)題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進(jìn)行下一步驟)。
解決辦法:請(qǐng)隨時(shí)監(jiān)控洗板過(guò)程,洗完后立即進(jìn)行下一步驟。
Elisa試劑盒注意事項(xiàng)
Elisa試劑盒解凍與存放:-20℃取出后建議放入2~8℃冰箱中解凍約,每隔一段時(shí)間輕輕搖晃均勻,不可直接放入溫度較高處解凍,避免因溫度改變太大,造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀,其質(zhì)量下降。若短期無(wú)法用完一瓶,建議無(wú)菌分裝,再放回冷凍,避免反復(fù)凍融。4℃長(zhǎng)時(shí)間保存后的變性脂蛋白及纖維蛋白,形成絮狀物質(zhì)變差。
Elisa試劑盒——Elisa實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
不正常的標(biāo)準(zhǔn)曲線
1 錯(cuò)誤的方法重懸標(biāo)準(zhǔn)品 加入正確量的溶液重懸標(biāo)準(zhǔn)品,重懸充分
2 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤 按照說(shuō)明書要求稀釋標(biāo)準(zhǔn)品
3 標(biāo)準(zhǔn)品污染 使用一次性的滅菌吸頭, 標(biāo)準(zhǔn)品貯存于2-8 ℃
4 錯(cuò)誤的倍比稀釋步驟 按照說(shuō)明書倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品
5 波長(zhǎng)選擇錯(cuò)誤 TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用,而 前者比色波長(zhǎng)為450nm,后者為492nm。雙波長(zhǎng)比色分析優(yōu)于單波長(zhǎng)。
6 標(biāo)準(zhǔn)品混用 不同批號(hào)試劑勿混用
7 試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長(zhǎng),溫度太高,標(biāo)準(zhǔn)品失活 盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間,夏季應(yīng)放冰塊降溫
8 ELISA未終止而直接檢測(cè)450nm和620nm TMB顯色需終止后檢測(cè),否則會(huì)出現(xiàn)620nm比450nm讀數(shù)高的現(xiàn)象。(數(shù)值仍有梯度規(guī)律)