使用血清細(xì)胞培養(yǎng)的操作技巧

1.保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃時(shí)，請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月。若一次無(wú)法用完一瓶，建議無(wú)菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。

2.將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過(guò)程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。

3.一旦在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生su時(shí)，應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股鷖u和血清中的基本成分在解凍后就開(kāi)始降解。

4.解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。

   抗體的特異性鑒定：抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力?？贵w的特異性高,它的識(shí)別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以 交叉反應(yīng)率來(lái)表示。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)測(cè)定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線(xiàn),計(jì)算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時(shí)的濃度,并按 公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無(wú)窮大時(shí),表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0,即該血清的特異性較好。

    細(xì)胞培養(yǎng)的污染源:微生物污染：微生物污染的原因可分為2個(gè)階段：實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備階段和實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程。準(zhǔn)備階段的原因包括：實(shí)驗(yàn)耗材滅菌不徹底；細(xì)胞房清潔度不夠，增加微生物污染風(fēng)險(xiǎn)；超凈臺(tái)潔凈度不夠，消毒不夠徹底，紫外線(xiàn)沒(méi)有預(yù)先照射足夠時(shí)間，表面沒(méi)有用酒精擦拭；沒(méi)有帶無(wú)菌乳膠手套；試劑本身已經(jīng)污染，沒(méi)有檢測(cè)出來(lái)。實(shí)驗(yàn)操作中的污染，往往是不夠嚴(yán)謹(jǐn)，粗心大意造成，如：手從無(wú)菌試劑的上方經(jīng)過(guò)；移液器操作不當(dāng)，液體接觸到移液器前端；移液管吸液過(guò)猛；槍頭沒(méi)有更換，較差污染等。不同的微生物污染物對(duì)細(xì)胞的影響也有差別，微生物中支原體和病毒對(duì)細(xì)胞形態(tài)和技能的影響是長(zhǎng)期的，緩慢的和潛在的。而霉菌和細(xì)菌增殖迅速，能在很短的時(shí)間內(nèi)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)或產(chǎn)生有毒物質(zhì)殺滅細(xì)胞。  

胎牛血清的使用注意事項(xiàng)：

 1、解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。

C至室溫)，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大(如-20。C至37。C)，實(shí)驗(yàn)顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

 2、解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生.

 3、請(qǐng)勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。