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擴增檢測實驗室原則上分為4個單獨的工作區(qū)域:試劑儲存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染,進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行。
雖然這些污染對PCR實驗結(jié)果的影響已經(jīng)受到了廣泛重視,多數(shù)實驗室對污染控制都采取了各種辦法,比如定期大掃除清理、劃分操作區(qū)域、試劑分裝、操作謹慎、重復實驗、多角度驗證結(jié)果。但是微量的核酸片段就能被擴增,所以對污染物的控制不僅僅是做到這些就能夠杜絕和避免的,關(guān)鍵是需要從源頭控制。
檢測過程對可能出現(xiàn)的假陽性和假陰性進行質(zhì)量控制,除了檢測商品試劑盒所提供陽性和陰性對照外,每次臨床樣本檢測時,至少應(yīng)當有1份弱陽性和3份陰性質(zhì)控樣本(多份陰性質(zhì)控樣本設(shè)置對實驗室“污染”所致假陽性的監(jiān)控更為有效),隨機放在所檢測標本的中間。弱陽性質(zhì)控樣本可為檢測陽性的滅活稀釋后保存的臨床樣本、滅活病毒或假病毒顆粒等,如所采用的商品化試劑盒有“內(nèi)標”控制假陰性,或弱陽性質(zhì)控樣本來源困難,可暫不設(shè)弱陽性質(zhì)控。陰性質(zhì)控樣本采用標本采集管內(nèi)溶液即可。質(zhì)控樣本應(yīng)與臨床標本同等對待,參與樣本核酸提取和擴增檢測全過程。
一個完整和有效的生化分析系統(tǒng),由檢測儀器、試劑、校準品、及相關(guān)的操作程序、質(zhì)量控制程序、設(shè)備維護程序等組合而成。完整的分析系統(tǒng)有明確的系統(tǒng)性能驗證和方法特征,為實驗室規(guī)定了分析系統(tǒng)的適用范圍、樣本種類、配套試劑與校準物,及與檢驗結(jié)果質(zhì)量相關(guān)的方法特征:如線性范圍、精密度、準確度、干擾因素和參考范圍等。
5.按照試劑儲存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)方向空氣壓力應(yīng)當以遞減的方式進行,使得PCR檢驗實驗室的空氣流向應(yīng)當按照試劑儲存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)方向進行,防止擴增產(chǎn)物順空氣氣流進入擴增前的區(qū)域??諝饬飨驊?yīng)當為單向,禁止下游污染上游。應(yīng)當設(shè)置合理的壓差梯度,并安裝壓差監(jiān)測裝置,以有效證明空氣流向,壓差梯度不宜低于5帕。