武漢默沙克生物????科技有限公司是一家專門從事生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)的企業(yè)。目前可提供各種抗1體、免疫學(xué)試劑盒、生化試劑、ELISA試劑盒、分子生物學(xué)試劑等多用途多屬種的高品質(zhì)產(chǎn)品，服務(wù)涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。

5. 在無(wú)抗生1素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞一代。

   6. 重復(fù)步驟4。

   7. 在無(wú)抗生1素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4～6代，確定污染是否以已被消除。  

     我司分析細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)也叫細(xì)胞克1隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克1隆技術(shù)來(lái)說(shuō)，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)必不可少的過(guò)程。

 三．實(shí)驗(yàn)材料

   儀器設(shè)備：1．酒精燈、三角燒瓶，培養(yǎng)皿；2．鑷子、剪刀、剖針；3．雙筒解剖顯微鏡；4．光照培養(yǎng)箱或溫室；

   材料煙1草無(wú)菌苗、豌豆幼苗。

   試劑

   （1）MS培養(yǎng)基，植物激1素：NAA、6-BA等；

   （2）飽和漂液（次氯1酸鈉）；

   （3）70%酒精、100%酒精、酒精棉球；

   （4）無(wú)菌水

   四．實(shí)驗(yàn)步驟

   豌豆苗的莖尖培養(yǎng)

   ⑴取發(fā)芽6天的豌豆幼苗10株，簡(jiǎn)取1厘米左右的莖尖，浸入70%的酒精中1分鐘，再浸入飽和次氯1酸鈉溶液中消毒15分鐘，（此步以后要求無(wú)菌）用無(wú)菌水中沖洗5次，在滅菌的濾紙上吸干水分，放入滅菌的培養(yǎng)皿中。

1、染色過(guò)強(qiáng) 原因 解決辦法 抗1體的濃度過(guò)高或抗1體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 降低抗1體滴度（一般指濃縮性抗1體）抗1體孵育時(shí)間：室溫1 小時(shí)或4℃過(guò)夜 孵育溫度過(guò)高，孵育溫度超過(guò)37℃ 一般室溫20-28℃ DAB 顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或 DAB 濃度過(guò)高 顯色時(shí)間不能超過(guò)5-10分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn) 2、非特異性背景染色 原因 解決辦法 操作過(guò)程中沖洗不充分 每步?jīng)_洗3×5 組織中含過(guò)氧化物酶未阻斷 可再配置新鮮3%H2O2封閉，孵育時(shí)間延長(zhǎng) 組織中含內(nèi)源性生物素 正常非免疫動(dòng)物血1清再封閉 血1清蛋白封閉不充分 延長(zhǎng)血1清蛋白封閉時(shí)間

7. 包埋

包埋時(shí)，用鑷子夾取石蠟?zāi)Ｗ樱ń饘儋|(zhì)地）在酒精燈上稍加熱，放在平的桌面上，從溫箱中取出盛放純石蠟的蠟杯，倒入少許石蠟。再將鑷子稍加熱，夾取材料將切面朝下放入蠟?zāi)Ｖ?，排列整齊。再放上包埋盒，輕輕倒入熔蠟。

8. 切片

①將已固定和修好的石蠟塊裝在切片機(jī)的夾物臺(tái)上。

②將切片刀固定在刀夾上，刀口向上。

③搖動(dòng)推動(dòng)螺旋，使石蠟塊與刀口貼近，但不可超過(guò)刀口。

④調(diào)整石蠟塊與刀口之間的角度與位置，刀片與石蠟切片約成15度左右。

⑤調(diào)整厚度調(diào)節(jié)器到所需的切片厚度，一般為4-10微米。

⑥一切調(diào)整好后主可以開始切片。此時(shí)右手搖動(dòng)轉(zhuǎn)輪，讓蠟塊切成蠟帶，左手持毛筆將蠟帶提起，搖轉(zhuǎn)速度不可太急，通常以40-50r/min。