等溫核酸試劑盒

RPA的原理;

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng)DNA合成，對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中，由兩個(gè)相對(duì)的引物起始一個(gè)合成事件。整個(gè)過(guò)程進(jìn)行得非?？?，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴(kuò)增產(chǎn)物。

近年來(lái)，等溫?cái)U(kuò)增方法的發(fā)展讓基因檢測(cè)得以擺脫熱循環(huán)儀器的使用，因此更加便捷化?；诘葴?cái)U(kuò)增方法，多種具有POCT潛力的SARS-CoV-2檢測(cè)技術(shù)得以開(kāi)發(fā)出來(lái)。特別是結(jié)合CRISPR技術(shù)后，檢測(cè)的特異性和靈敏度得到了進(jìn)一步提升。盡管如此，幾乎所有這些報(bào)道的技術(shù)僅僅證明了其在單基因檢測(cè)中的應(yīng)用。然而，臨床認(rèn)可的金標(biāo)準(zhǔn)方法，如RT-qPCR，通常需要檢測(cè)兩個(gè)基因。因?yàn)殡p基因檢測(cè)能夠有效地避免因基因部分降解，基因拷貝數(shù)差異和擴(kuò)增錯(cuò)誤等引起的潛在假陰性結(jié)果。

核酸提取技術(shù)亦可分為2部分，<樣本裂解>與<核酸純化>，目前市面上常見(jiàn)的樣本裂解技術(shù)有<物理加熱裂解>、<蛋白酶K裂解>、<一步法核酸提取>，核酸純化技術(shù)有<梯度離心法>、<硅膠模柱法>、<磁珠法>。因此對(duì)于核酸提取技術(shù)的不同，樣本裂解及核酸純化環(huán)節(jié)不盡相同，操作繁瑣程度不同，提取效率、核酸的純度亦會(huì)不同。而復(fù)雜的操作更易導(dǎo)致氣溶膠污染，帶來(lái)風(fēng)險(xiǎn)。因此，選擇合適的提取技術(shù)，對(duì)當(dāng)前疫情防控至關(guān)重要。