分光光度計(jì)的工作原理

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分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光線被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

單色光輻射穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長(zhǎng)度）成正比，其關(guān)系如下式：

A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc

式中 :A 為吸光度；

I0為入射的單色光強(qiáng)度；

I 為透射的單色光強(qiáng)度；

T 為物質(zhì)的透射率；

k 為摩爾吸收系數(shù)；

L 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長(zhǎng)；

c 為物質(zhì)的濃度；

1)1900型等分光光度計(jì)，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點(diǎn)是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測(cè)微弱光電信號(hào)，而不能用來(lái)檢測(cè)強(qiáng)光。否則容易產(chǎn)生信號(hào)漂移，靈敏度下降。針對(duì)其上述特點(diǎn)，在維修、使用此類儀器時(shí)應(yīng)注意不讓光電倍增管長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下，因此在預(yù)熱時(shí)，應(yīng)打開(kāi)比色皿蓋或使用擋光桿，避免長(zhǎng)時(shí)間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。

2)放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。

3)比色杯的配套性問(wèn)題。比色杯必須配套使用，否則將使測(cè)試結(jié)果失去意義。在進(jìn)行每次測(cè)試前均應(yīng)進(jìn)行比較。具體方法如下;分別向被測(cè)的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長(zhǎng)處，石英比色杯;220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯：700nm處裝蒸餾水，將某一個(gè)池的透射比值調(diào)至100%，測(cè)量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應(yīng)考慮其對(duì)測(cè)試結(jié)果的影響。

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分光光度計(jì)的應(yīng)用范圍

超微量紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)是一類很重要的分析儀器，無(wú)論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域，還是在化工、環(huán)境檢測(cè)、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門(mén)，超微量紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)都有廣泛而重要的應(yīng)用。超微量紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析，常用于核酸，蛋白定量及細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)；超微量紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)已經(jīng)是現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。

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