等溫核酸試劑盒

RPA不受場地的限制，不需要昂貴儀器，對(duì)溫度要求低，恒溫?cái)U(kuò)增，時(shí)間短，可以在資源匱乏地區(qū)實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè)的目的，目前已廣泛用于食品安全及動(dòng)物疫病檢測(cè)，但國內(nèi)就PRA技術(shù)在禽病病原檢測(cè)中的研究并不多。未來RPA技術(shù)可能在以下方面進(jìn)一步突破：①研發(fā)專門引物設(shè)計(jì)軟件，降低引物設(shè)計(jì)難度。②反應(yīng)溫度范圍拓寬，不局限于某一溫度，可在某溫度范圍內(nèi)完成擴(kuò)增反應(yīng)。③實(shí)現(xiàn)多重檢測(cè)，結(jié)果判定更簡便直觀。④可擴(kuò)增長片段核酸。⑤研發(fā)出低廉的酶制劑，降低成本。相信隨著技術(shù)不斷進(jìn)步，勢(shì)會(huì)引起一場核酸檢測(cè)的革命，取代PCR技術(shù)在分子檢測(cè)中的霸主地位，在禽病病原的現(xiàn)場檢測(cè)中發(fā)揮更大的作用。

核酸試劑盒是如何工作的？

病毒的基因序列被設(shè)定為檢測(cè)靶點(diǎn)，通過對(duì)檢測(cè)樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，因PCR反應(yīng)模板僅為DNA，因此在進(jìn)行PCR反應(yīng)前，應(yīng)將新型冠狀病毒核酸（RNA）逆轉(zhuǎn)錄為DNA，使靶點(diǎn)的DNA序列指數(shù)級(jí)增加，每一個(gè)擴(kuò)增出來的DNA序列都可以于預(yù)先加入的熒光標(biāo)記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)，擴(kuò)增出來的靶點(diǎn)基因越多，累積的熒光信號(hào)就越強(qiáng)（就好比演唱會(huì)如果只有一個(gè)粉絲搖熒光棒很不顯眼，如果大家一起搖那就嗨了）。如果樣本中沒有該病毒，自然也就檢測(cè)不到熒光信號(hào)的增強(qiáng)了。

核酸試劑盒

核酸檢測(cè)試劑盒為什么會(huì)出現(xiàn)漏檢？

大家在新聞上看到過核酸檢測(cè)出現(xiàn)漏檢的現(xiàn)象，這是為什么呢？首先，我們對(duì)病毒認(rèn)識(shí)不足，疾病進(jìn)展目前都不清楚，這就可能導(dǎo)致采樣時(shí)間不合適，從而漏檢。第二，每個(gè)人的抵抗力不同，同樣都有了病毒，但有的人能快速地清除病毒，體內(nèi)病毒量少，自然不易檢出。第三，試劑盒有自身的靈敏度限制，也就是說樣本中的病毒量少到一定程度，試劑盒是檢測(cè)不出來的，這是核酸檢測(cè)技術(shù)上的限制，另外，樣本采集是否規(guī)范、轉(zhuǎn)運(yùn)保存是否恰當(dāng)?shù)纫蛩囟紩?huì)影響試劑盒的陽性檢出率。

LAMP:環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法的特征是針對(duì)目標(biāo)DNA鏈上的六個(gè)區(qū)段設(shè)計(jì)四個(gè)不同的引物然后再利用鏈置換反應(yīng)在一定溫度下進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)只需要把基因模板、引物、鏈置換型DNA合成酶、基質(zhì)等共同置于一定溫度下(60~65℃)、經(jīng)一個(gè)步驟即可完成。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會(huì)發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng) DNA合成，對(duì)模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的 DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中，由兩個(gè)相對(duì)的引物起始一個(gè)合成事件。