等溫核酸試劑盒

FAQ

能否進(jìn)行熒光終點(diǎn)分析?

可以。這樣比較的是反應(yīng)開始時(shí)的熒光和反應(yīng)結(jié)束時(shí)的熒光，熒光增強(qiáng)意味著發(fā)生了擴(kuò)增。

4能否支持生物素或熒光標(biāo)記的寡核苷酸?

支持。在RPA反應(yīng)中，連有生物素或熒光團(tuán)的引物與未修飾的引物表現(xiàn)差不多。據(jù)悉還沒有發(fā)現(xiàn)任何差異。

5跑膠前需要回收RPA產(chǎn)物嗎?

需要。RPA反應(yīng)中的物質(zhì)會(huì)干擾瓊脂糖電泳，如果不進(jìn)行產(chǎn)物回收，跑出來的帶會(huì)出現(xiàn)拖尾。

核酸試劑盒是如何工作的？

病毒的基因序列被設(shè)定為檢測靶點(diǎn)，通過對(duì)檢測樣本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，因PCR反應(yīng)模板僅為DNA，因此在進(jìn)行PCR反應(yīng)前，應(yīng)將新型冠狀病毒核酸（RNA）逆轉(zhuǎn)錄為DNA，使靶點(diǎn)的DNA序列指數(shù)級(jí)增加，每一個(gè)擴(kuò)增出來的DNA序列都可以于預(yù)先加入的熒光標(biāo)記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)，擴(kuò)增出來的靶點(diǎn)基因越多，累積的熒光信號(hào)就越強(qiáng)（就好比演唱會(huì)如果只有一個(gè)粉絲搖熒光棒很不顯眼，如果大家一起搖那就嗨了）。如果樣本中沒有該病毒，自然也就檢測不到熒光信號(hào)的增強(qiáng)了。

核酸試劑盒

怎樣檢測樣本中的病毒？

在檢測血液樣本時(shí)，運(yùn)用人工合成的抗原，通過與樣本中的特異性進(jìn)行抗原結(jié)合反應(yīng)并轉(zhuǎn)化成可視信號(hào)來進(jìn)行測定。目前，已批準(zhǔn)的病毒檢測試劑盒有膠體金法和磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法，膠體金法將反應(yīng)結(jié)果形成肉眼可見的條帶，檢測時(shí)間較短，一般15分鐘左右可以出結(jié)果，磁微粒化學(xué)發(fā)光法通過反應(yīng)過程中的光信號(hào)進(jìn)行檢測，靈敏度高于膠體金法，檢測過程一般需要半小時(shí)。

如何提高擴(kuò)增曲線的可重復(fù)性?

優(yōu)化擴(kuò)增曲線考慮以下因素: 對(duì)于低拷貝數(shù)模板，不穩(wěn)定擴(kuò)增可能是因?yàn)檫_(dá)到檢測限或者是反應(yīng)混勻程度不同（未混勻的反應(yīng)擴(kuò)增效率不佳）。另外，在低溫情況下存貯，重組酶和輔助蛋白在50%甘油情況下形成沉淀,也是可能導(dǎo)致不穩(wěn)定擴(kuò)增的原因。所以，20x核心反應(yīng)mix在室溫下解凍并震蕩渦旋將使其成為液體，不影響其功能,并且有效提高擴(kuò)增效率。不穩(wěn)定擴(kuò)增也可能是因?yàn)閙aster mix量不足，在加入體系前，用戶必須保證震蕩后20x核心反應(yīng)組分均一。