1. VASP通過調(diào)節(jié)Rab11依賴性TGF-β受體的質(zhì)膜靶向來促進(jìn)肝星狀細(xì)胞的TGF-β活化

    肝l病學(xué)第61卷，首1期，第361-374頁(yè)，2015年1月

2. Rab5活性調(diào)節(jié)GLUT4分類為胰島素反應(yīng)性和非胰島素反應(yīng)性內(nèi)體室：胰島素抵抗發(fā)展的潛在機(jī)制。

    內(nèi)分l泌學(xué)。 2014年9月; 155（9）：3315-28

將裂解液轉(zhuǎn)移到適當(dāng)大小的試管中，并置于冰上。

如果發(fā)生核裂解，則細(xì)胞裂解液可能變得非常粘稠，難以移液。 如果發(fā)生這種情況，可將裂解液通過27?號(hào)注射l器針頭3-4次以剪切基因組DNA。

通過離心10分鐘（在4°C下為12,000 x g）清除裂解物。

收集上清液并將樣品保存在冰上以備立即使用，或速凍并保存在-70°C以便將來使用。

小G蛋白是從屬于細(xì)胞調(diào)節(jié)因子中的一個(gè)超家族。Rho家族是小G蛋白中的一個(gè)亞家族，它在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞分裂以及基因轉(zhuǎn)錄中發(fā)揮主要作用。而本試劑盒中的Cdc42就屬于Rho亞家族中的一種， Cdc42參與生理活動(dòng)過程中其分子結(jié)構(gòu)會(huì)呈現(xiàn)出2種相互轉(zhuǎn)換的形式：與GTP結(jié)合的激l活狀態(tài)和與GDP結(jié)合的非活性狀態(tài)。

目前Cdc42蛋白活性的檢測(cè)主要是依據(jù)小GTP酶Cdc42可以與p21活化激酶（PAK）的p21結(jié)合區(qū)域（PBD）結(jié)合，使PAK活化從而發(fā)揮生物學(xué)功能，進(jìn)而間接的進(jìn)行Cdc42活性l功能的監(jiān)測(cè)。然而此方法在檢測(cè)過程中存在著一定的局限性比如GTP水解成GDP的速度過快以及Cdc42-GTP結(jié)合蛋白與p21結(jié)合區(qū)域之間較低的親和力，導(dǎo)致這種檢測(cè)方法的重復(fù)性較差。

試劑制備

1X Assay/Lysis Buffer：實(shí)驗(yàn)前用去離子水將5X的Assay/Lysis緩沖液稀釋成1X的緩沖液，并在使用前加入蛋白酶抑制l劑如1 mM PMSF, 10 μg/mL leupeptin（亮肽素），或 10 μg/mL aprotinin（抑肽酶）。

樣品處理

貼壁細(xì)胞

1. 培養(yǎng)細(xì)胞密度達(dá)到大約80%-90%之間（直徑10 cm培養(yǎng)皿，~107個(gè)細(xì)胞），并用活性劑或抑制l劑進(jìn)行處理。

2. 吸去培養(yǎng)基并用冰冷的PBS洗滌兩次。

3. 向細(xì)胞中加入1X Assay/Lysis緩沖液（每個(gè)直徑10cm的組織培養(yǎng)皿中加入0.5-1mL）。

4. 將培養(yǎng)皿放置于冰上處理10-20分鐘。

5. 用細(xì)胞刮棒把細(xì)胞從培養(yǎng)皿下分離下來。

6. 將細(xì)胞裂解物轉(zhuǎn)入合適的管中并放置于冰上。

7. 如果核發(fā)生裂解，細(xì)胞裂解物可能會(huì)變得非常的粘稠并且難以吸取。當(dāng)這種情況出現(xiàn)時(shí)，將細(xì)胞裂解物用27?的注射l器針頭來回吸取3-4次，以破壞基因組DNA，從而避免上述情況的出現(xiàn)。

8. 4°C 12000 g, 離心10 min。

9. 收集上清（~1-2 mg總蛋白）并放置于冰上使用。如果樣品不立即使用，請(qǐng)將處理后的樣品存放于-70°C條件下。