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采用兩譜聯(lián)用定性方法

HPLC中常采用紫外光、紅外對(duì)也要色譜進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。然而，在工業(yè)生產(chǎn)中，常采用紫外檢測(cè)儀掃描 HPLC中的有機(jī)化合物，通過(guò) HPLC反應(yīng)定性地得出一些未知有機(jī)化合物的有用信息。通過(guò)相關(guān)工作人員長(zhǎng)期的經(jīng)驗(yàn)，他們傾向于用液相色譜的大值對(duì)紫外線進(jìn)行掃描，通過(guò)全波長(zhǎng)掃描尋找兩個(gè)液相色譜高峰之間的聯(lián)系，然后通過(guò)上一步使用保留值的定性分析方法，對(duì)液相色譜中的未知無(wú)進(jìn)行性質(zhì)的判斷。除了這些，工作人員為了使現(xiàn)代的液相色譜定性分析方法更廣泛地應(yīng)用，一般采用色譜與質(zhì)譜聯(lián)用，這樣的操作可以對(duì)未知的有機(jī)化合物進(jìn)行多層次的質(zhì)譜分析，提高液相色譜的定性分析水平，在某個(gè)方面也促進(jìn)了液相色譜與質(zhì)譜的聯(lián)系和應(yīng)用，為現(xiàn)代液相色譜分析方法提供了非常有效的兩用色譜定性分析方法。隨著科技的不斷進(jìn)步，串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的應(yīng)用，使得現(xiàn)代 HPLC以雙譜聯(lián)用定性分析法廣泛應(yīng)用于中藥領(lǐng)域，在中藥品種、藥品鑒定等方面技術(shù)十分成熟，同時(shí)成果也十分顯著。除采用 HPLC和 MS聯(lián)用技術(shù)外，還采用了色譜與 NMR聯(lián)用等技術(shù)，這是一種實(shí)用的兩譜聯(lián)用技術(shù)，由于這一技術(shù)對(duì)定性要求不高，因此具有很好的通用性，但也因?yàn)樯V和 NMR聯(lián)用技術(shù)的要求較低，所以它在實(shí)際應(yīng)用中的使用也較少。

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液相色譜儀輸液系統(tǒng)：

輸注系統(tǒng)即高壓恒流泵，其作用是提供穩(wěn)定、準(zhǔn)確的流量。

1、溶劑過(guò)濾頭。液體過(guò)濾頭或沉淀器主要用于過(guò)濾在流動(dòng)相中可能存在的顆粒狀雜質(zhì)。長(zhǎng)期使用后，雜質(zhì)會(huì)堵塞溶劑過(guò)濾頭的濾板孔隙，或長(zhǎng)期使用緩沖液，過(guò)濾頭表面很容易形成一層膜，妨礙正常的流動(dòng)相通過(guò)。嚴(yán)重者，即使是已經(jīng)超聲處理的溶劑，泵吸液時(shí)仍會(huì)有氣泡在四氟化輸液管中產(chǎn)生，因此要經(jīng)常清洗。清潔劑可選用乙醇或30%稀硝i酸溶液，正相系統(tǒng)需注意濾頭干燥。

2、單向閥。本單向閥的作用是確保液體朝一個(gè)方向流動(dòng)，保證高壓恒流泵的穩(wěn)定注入。在日常使用中，可通過(guò)觀察壓力情況初步判斷流量是否正常。若系統(tǒng)經(jīng)過(guò)一定時(shí)間平衡，壓力應(yīng)穩(wěn)定。但是如果有壓力波動(dòng)，就表示流量是不穩(wěn)定的，如果沒(méi)有壓力，表示沒(méi)有流動(dòng)。大多數(shù)情況下都是由于氣門中混入了氣泡或雜質(zhì)。如果出現(xiàn)氣泡，應(yīng)將放空閥打開(kāi)，按沖洗鍵將氣泡從內(nèi)部排出。如單向閥與雜質(zhì)混在一起，必須清洗。清潔溶劑可選用乙醇，安裝時(shí)要注意標(biāo)記環(huán)向。

一九七五年，由美國(guó) Dow Chemical公司 Small等人開(kāi)發(fā)出一種新型的離子交換色譜儀器，該儀器采用電導(dǎo)率檢測(cè)器，從高本底電導(dǎo)中分離出無(wú)機(jī)、有機(jī)離子，這種方法稱為離子色譜(IC)。離子層析技術(shù)使 HPLC的分析領(lǐng)域擴(kuò)展到了大多數(shù)常見(jiàn)的無(wú)機(jī)、有機(jī)陰離子和60多種金屬陽(yáng)離子的分析。近幾年來(lái)，為了滿足復(fù)雜樣品對(duì)分離柱效的需要，采用更細(xì)粒徑固定相超高壓液相色譜(UPLC)，大大提高了分離效率，使液相色譜的應(yīng)用范圍更廣。本儀器主要由進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、在線檢測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等部分組成。

20世紀(jì)80年代，國(guó)外許多分析儀器制造商開(kāi)始投入大量的資金和技術(shù)力量，研制開(kāi)發(fā) HPLC產(chǎn)品。大量美國(guó)、日本、法國(guó)等 HPLC儀器制造商，如美國(guó) Waters、 HP、 SP、 Beckman、日本的島津、日立、 JASCO、法國(guó)的吉爾森等公司紛紛推出自己的產(chǎn)品，產(chǎn)品更新?lián)Q代快，性能不斷提高。例如，日本島津公司在不到十年的時(shí)間里，LC-3A、LC-4A、LC-5A、LC-6A、LC-7A、LC-8A、LC-9A、LC-10A、LC-20A等十代產(chǎn)品的發(fā)展勢(shì)頭非常迅猛。隨著液相色譜儀器性能的不斷提高，各種新的分離方式也不斷出現(xiàn)，使得液相色譜無(wú)論在技術(shù)上還是儀器上，都有了一個(gè)又一個(gè)的飛躍。

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LC從開(kāi)始的流動(dòng)相瓶到結(jié)束的廢液瓶之間，它的流通管道是完全封閉的，雖然內(nèi)部壓力很高，但是在色譜儀外部沒(méi)有一滴液體。如發(fā)生漏液現(xiàn)象，系統(tǒng)一般會(huì)發(fā)出報(bào)錯(cuò)信號(hào)，不能正常工作。對(duì)運(yùn)行人員來(lái)說(shuō)，漏液是一件很痛苦的事，因?yàn)橛行┞┮簡(jiǎn)栴}直觀、容易解決，但也有一些漏液?jiǎn)栴}比較復(fù)雜，需要深入排查。

接合處漏：

接頭漏液一般發(fā)生在色譜柱的接頭上，這里的漏液現(xiàn)象比較直觀，一般是液體積流在色譜柱頭，引起壓力波動(dòng)。一般情況下，可以通過(guò)擰緊或更換管道接頭來(lái)解決液體泄漏問(wèn)題。但是，過(guò)壓緊固會(huì)引起金屬接頭漏液，以及塑料接頭磨損。如稍加擰緊連接頭無(wú)法解決液體泄漏問(wèn)題，則應(yīng)將接頭取下，檢查是否損壞(例如卡套損壞，密封表面有雜質(zhì))；損壞的接頭應(yīng)更換。