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液相色譜工作原理
儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi), 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對運動時, 經(jīng)過反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過程,各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出, 通過檢測器時, 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。
液相色譜儀應(yīng)用范圍
它的應(yīng)用范圍比較大,而且有不斷拓展的趨勢。制備純化樣品是它的基礎(chǔ)功能,通過色譜分離,樣品中目標(biāo)物質(zhì)被分離出來有待進一步研究,比如分離水樣中有機物、食品中以備分析等。然后是天然成分研究,有助于中藥學(xué)的發(fā)展。分析前人留下的珍貴藥典,通過藥性研究造福人類。提高產(chǎn)品質(zhì)量,以提高它的價值和效用,比如純化藥品、純化蛋白質(zhì)制品等。還有一個方向是用于產(chǎn)品合成的研究,通過獲得一些純度較高的化合物將以促進合成實驗的進行。
液相色譜的操作步驟
1).首先對流動相進行過濾,根據(jù)需要選擇不同的濾膜,一般為有機系和水系,常用的孔徑為0.20um和0.45um。
2).對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。
3).正常情況下,儀器首先用甲醇沖洗10-20分鐘,然后再進入測試用流動相(如流動相為緩沖試劑,則要二次重蒸水沖洗10-20分鐘,直至色譜柱中有機相沖凈為止)。
4).一般情況下,流動相沖洗20-30分鐘后,儀器方可穩(wěn)定,重要的是儀器基線走后,方可進樣測試。
5).同時進兩針標(biāo)樣,將其結(jié)果相比較,其結(jié)果的比值在0.98-1.02之間后,就可以正式進行樣品的測試了。
6).樣品測試結(jié)束后,就要進行色譜儀及色譜柱的清洗和維護。如流動相為緩沖試劑,同樣也要用重蒸水清洗10-20分鐘,方可用有機相進行保護,否則,有損色譜柱。
7).關(guān)機時,先關(guān)計算機,再關(guān)液相色譜。
8).填寫登記本,由負(fù)責(zé)人簽字。