【廣告】
PCR實驗室建立方法
1、建立樣品準(zhǔn)備區(qū)
這個區(qū)域?qū)iT用作樣品的準(zhǔn)備,在制備和操作用于核酸提取的試劑時應(yīng)該采取預(yù)防措施:⑴PCR產(chǎn)物和帶有要擴增序列的DNA克1隆不能在這個房間操作。2、冷凍水調(diào)節(jié):采用7℃左右的冷水作為冷源,通過電動閥開大或者關(guān)小來控制水流量,從而輕易控制制冷量,而電動閥結(jié)構(gòu)象家用水龍頭一樣簡單,所以故障率幾乎為零。⑵組織培養(yǎng)物、組織標(biāo)本和血1清樣品都帶進樣品準(zhǔn)備間處理,以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA。⑶用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克1隆的工具,也不能用作操作靶序列。⑷DNA樣品應(yīng)該用有專門的防護或正壓活塞式移液管操作,以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。⑸大體積樣品應(yīng)該用單獨包裝的無菌一次性移液管吸取。⑹管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生,而且管子不能用力崩開,這樣會產(chǎn)生氣溶膠。⑺任何時候都應(yīng)該穿實驗服和帶手套,手套要經(jīng)常更換,尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實驗服要專門用于樣品準(zhǔn)備間,經(jīng)常清洗。
4、PCR實驗室試劑的操作。
⑴所用的所有溶液都應(yīng)該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。1、無塵車間室地面要求整體性好,平整、無縫隙、耐磨、耐腐蝕、耐撞擊、不易積靜電、易除塵清洗(如采用環(huán)氧自流平整地坪或現(xiàn)澆水磨石地面)。⑵所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾的去離子水,用0.22μm過濾的,并且是高壓滅菌。⑶在20℃到25℃貯存的試劑建議加點像疊氮鈉一類的抗微生物劑,在擴增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴增反應(yīng)。⑷所用試劑都應(yīng)該以大體積配制,實驗一下看試劑是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量進行貯存。⑸所有試劑和樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。⑹新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗。⑺樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時都應(yīng)該小心保存。