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發(fā)布時間:2021-09-14 19:39  






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用不同的方法對色譜柱會有不同的要求,但是每一種色譜柱都有其清潔要求,這在色譜柱上可以找到,必須按照以上的要求來進行,否則會導致色譜柱效下降,色譜柱的使用壽命縮短,檢測波長會因品種的不同而有不同的要求,這里需要指出的是要注意觀察檢測器燈能量的變化,如基線波動大,活性成分的響應值突然變小等,對檢測器電鏡能量的變化,要注意觀察到檢測器中能量的變化,如基線波動大,活性成分的響應值突然變小等,有可能是由于燈的能量不足導致的,所以實際使用時要根據(jù)實際情況更換。流動速度也因品種而異,一般為1.0 ml/min,流速不能隨意改變,尤其作為 QC人員,但作為研發(fā)人員,有時為了摸索條件或進行方法耐用性驗證,會改變流速來評估該方法的適用性。對不同品種的進樣量也有不同的規(guī)定,進樣量這個現(xiàn)在都是自動進樣,所以進樣精密度都是很好的,不用特別強調。

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操作員:,作為液相操作人員,必須認真學習夜想說明書,掌握液相硬件和軟件的操作,掌握日常維護,掌握基本故障的排除與維修。普通液相的操作規(guī)程也是由操作人員起草的,因此只要嚴格按照操作要求操作,一般都不會出現(xiàn)問題,當然對液相的日常維護維護來說,特別是對液相的日常維護保養(yǎng)來說,要注意的是液相的日常維護保養(yǎng),泵密封墊的清洗、系統(tǒng)的清洗、溶劑過濾頭的清洗等方面都不會出現(xiàn)問題,尤其是對液相的日常維護,不會造成不必要的麻煩。第二,操作者在配制液相分析樣品時,好由同一人單獨完成,以免不必要的意外誤差。4、液體安裝環(huán)境:儀表應盡量安裝在水平位置,遠離振動、電磁干擾的屋內,有條件時盡量把液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)分開,一方面是防止色譜基線噪聲太大、基線不穩(wěn)等,一方面是為了減少對人體的危害。



六通閥的正確使用與維護①樣品進樣前,要用0.45μ的濾膜過濾,以減少微粒對進樣閥的磨損。②旋轉閥芯時不要太慢,不要停留在中間位置,否則流動相受阻,使泵內壓力急劇上升,甚至超過了泵的壓力;再轉到進樣位置,過高的壓力會使柱頭損壞。③為了防止進樣閥內的緩沖鹽及樣品殘留,每次分析結束后應沖洗進樣閥。一般可采用清水沖洗,或先用溶樣溶劑沖洗,再用清水沖洗。

有關流動相1.無過濾的流動相由于柱塞、密封環(huán)、氣缸體和單向閥等雜質顆粒都會磨損,因此,應該預先清除流動相中的任何固體顆粒。好的流動相是在玻璃容器中蒸餾,而通常的過濾方法是濾過,可以使用 Millipore濾膜(0.2μ m或0.45μ m)等過濾器。泵入口處應接砂濾棒(或片)。應該經常清洗或更換輸液泵的濾器。泵用后不能及時清洗移動相中不得含有腐蝕性物質,含有緩沖液的流動相不能留在泵中,特別是當泵停泵過夜或更久時。若含有緩沖液的流動相留在泵中,可能會析出鹽的微晶,如上述固體顆粒那樣損壞密封環(huán)和柱塞,甚至只是因為溶液處于靜止狀態(tài)時,會析出。所以,必須用純水將泵完全清洗干凈,然后換成適合于保存色譜柱和有利于泵維護的溶劑(對于反相鍵合硅膠固定相,可能是或-水)。



先要認識到,一般國產其實不需要額外的過濾處理,直接使用是沒有問題的。甚至某些固體顆粒雜質,都可以從液相流路系統(tǒng)前端的過濾頭中排除。真正容易出現(xiàn)問題的是水中的細菌。新制純水在室內放置數(shù)天后會產生細菌,而這些細菌雖然肉眼看不到,卻足以堵塞柱狀填料顆粒的空隙,導致柱子迅速報廢。

色譜儀是一種易學難用的儀器,尤其注重儀器的正確使用。流體工作者接觸到流動相,流動相是引起液相色譜各種問題的主要來源。液相色譜儀常見的故障有堵塞和漏漏。以下對這兩點分別展開討論。(注:流動相以為例,色譜柱以C18為例)“堵”的現(xiàn)象是柱壓異常升高,直接原因是流路不暢。造成“堵塞”的原因:流動相中的細菌污染。阻塞主要發(fā)生在色譜柱前端,流動相中存在雜質,細菌是雜質的主要來源。長時間,濾頭粘附細菌,造成泵液不能正常工作這一問題的解決辦法就是保證水的可靠性。以下是兩種建議方法:(1)好購買實驗室純水機,既方便又可靠,質量也放心。的缺點是價格昂貴。(2)成箱購買市售品牌純凈水,如怡寶或娃哈哈500 ml,這些水的質量足以滿足液相色譜的要求。有一個細節(jié)值得注意:在絕大多數(shù)書籍中,凡談到配制流動相到都要進行過濾的步驟。



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對萃取柱進行活化處理:選一種溶劑經 SPE小柱潤濕、活化后,試著將該填料與固相表面緊密接觸,容易吸附,也能去除柱中可能存在的雜質,減少污染;然后,選擇一種極性和 pH值與樣品基體相似的溶液替代溶劑,使樣品溶液與吸附劑表面良好接觸,提高萃取效率。SPE的一般做法是:采用選擇性吸附和選擇性洗脫的色譜分離原理,使液體樣品經過吸附劑,保留其中的分析物,用適當強度的溶劑洗去雜質,再用少量的溶劑洗脫,達到快速分離、凈化和濃縮的目的。固相萃取小柱還具有選擇性吸附干擾雜質的作用,在使用合適的溶劑時,讓分析物清洗,或同事吸附雜質和分析物,選擇洗脫分析物的操作。

當樣品經過 SPE柱時,固相對分析物吸附在固體表面,其它組分則隨樣品母液流經柱,然后用適當?shù)娜軇┫疵摚滔噍腿∵^程中固相對分析物的吸引力要大i。SPE本身按其原理可分為四類:反向 SPE (RPSPE)、正 SPE (NPSPE)、離子交換性 SPE (IESPE)、吸附 SPE (Absorption)。固相萃取大多用于處理液體樣品,用于提取、濃縮和凈化樣品中的揮發(fā)性和半揮發(fā)性化合物;如果需要作為固體樣品使用,首先要將固體樣品處理成液態(tài)。隨著單一 SPE處理數(shù)量的增加,固相萃取小柱分析器的時效性將變得頻繁而復雜,人為誤差很大地影響處理樣品的重現(xiàn)性,不利于定量分析結果的定量分析工作。

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