低溫生物菌種怎么保藏

菌種保藏(culture preservation，culture collection)是指保持微生物菌株的生活力和遺傳性狀的技術?；蚪浫斯みx育得到的變異型純種，使其存活、不丟失、不污染雜菌、不發(fā)生或少發(fā)生變異，保持菌種原有的各種特征和生理活性?；驹硎鞘刮⑸锏纳顒犹幱谛菝郀顟B(tài)，也就是使微生物的新陳代謝作用限制在低范圍內。干燥、低溫和隔絕空氣是保證獲得這種狀態(tài)的主要措施。有針對性地創(chuàng)造干燥、低溫和隔絕空氣的外界條件，就是微生物菌種保藏的基本技術。常用的方法有凍干保藏法、深低溫保藏法、液氮保藏法、礦油封藏法、固體曲保藏法、砂土管保藏法、瓊脂穿刺保藏法等。日常工作中，常選用4℃冰箱進行短時間的菌種保藏

低溫生物菌種的原理

菌種保藏有多種方法，其原理大多大同小異，主要是運用一些方式盡量降低生物體內的代謝，達到延長生命，減少變異的目的。通常采用的方法為低溫、缺氧、干燥。

低溫主要對菌種產生兩方面的影響，首先，較低的溫度可以減緩機體細胞的酶活，降低新陳代謝，達到保藏菌種的目的。其次，低溫同時會導致菌體誘發(fā)菌絲自溶機制，如果降溫過程失誤，同樣會造成機體的機械損傷和溶質損傷。

微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于不活躍或相對靜止的狀態(tài)，才能在一定的時間內使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。

低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以，菌種保藏方法雖多，但都是根據這三個因素而設計的。

                                                          低溫生物菌種的制備是什么？

將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產上延續(xù)使用半年左右。放線孢子的培養(yǎng)基大多是采用麩皮或豌豆浸出液、牛肉膏及無機鹽與瓊脂制成的。將斜面孢子接入擴大的扁瓶孢子培養(yǎng)基中,于28～37℃培養(yǎng)5～14天。所獲得的大量孢子可直接作為種子罐 (6)的種子。如果有些生產菌種不產孢子，如赤霉產生菌或產孢子不多的,則可采用搖瓶（5）液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿等）,及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐(7)的種子應是生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。

分離篩選低溫生物菌種的基本程序

流程

4.1 優(yōu)良糖化酶菌株的分離與篩選

融化培養(yǎng)基→倒平板→打散孢子團?！荻认♂尅坎计桨濉囵B(yǎng)觀察→滴加碘液→挑菌落→接種→培養(yǎng)→糖化酶活力測定→菌種保存

4.2 酸乳制品中的乳酸菌的分離

制培養(yǎng)基→倒平板→梯度稀釋→涂布平板→培養(yǎng)觀察→挑菌落→接牛乳管→培養(yǎng)觀察→傳代培養(yǎng)→挑選凝乳管→乳酸測定→菌種保存

5 步驟

優(yōu)良糖化酶菌株的分離與篩選

（1）融化淀粉察氏培養(yǎng)基，稍冷后倒平板與斜面數個。

（2）取種曲少許，加入10mL帶玻璃球的無菌生理鹽水的三角瓶中，用力振蕩打散孢子團粒，使之形成均勻的孢子懸浮粒。然后將其用無菌紗布過濾于無菌試管中。

（3）將上述濾液以10倍稀釋法知釋至10-7，取后3個稀釋度的稀釋液各0.2mL，于淀粉察氏培養(yǎng)基平板上用無菌涂布器分別依次涂布2至3個皿，30℃培養(yǎng)1~2d。

（5）性能測定：測定各菌落的糖化酶活力。