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對(duì)于生長(zhǎng)的組織培養(yǎng)液中的細(xì)胞,首先移除培養(yǎng)基,然后加入0.1M HCl處理細(xì)胞。孵育10分鐘并觀察細(xì)胞是否被裂解;如果裂解不充分,接著孵育10分鐘并觀察。以大于600g離心力于室溫離心,收集上清直接用于實(shí)驗(yàn)。臨用前在0.1M HCl中加入0.1%至1%濃度的Triton-x 100可增強(qiáng)細(xì)胞和組織裂解。在這個(gè)濃度范圍內(nèi),去污劑并不干擾試驗(yàn)的結(jié)合部位,但是會(huì)適度的增加光密度值。含有Triton的樣品需利用標(biāo)準(zhǔn)曲線估計(jì)濃度,為了較精l確的測(cè)定,標(biāo)準(zhǔn)曲線需以相同方式稀釋。取1 mL細(xì)胞培養(yǎng)上清加入10μL濃鹽酸,600g離心力于室溫離心,上清液直接用于實(shí)驗(yàn)測(cè)定分析。
武漢紐斯特生物科技有限公司(WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd),系美國(guó)生命科學(xué)試劑供應(yīng)商美國(guó)NewEastBio在中國(guó)的子公司。美國(guó)NewEastBio專(zhuān)注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域,主要產(chǎn)品有小分子、ELISA試劑盒、蛋白等,與世界高校和研究所、世界大制藥公司、生物科技公司和醫(yī)院等客戶建立了長(zhǎng)期穩(wěn)定的合作關(guān)系,產(chǎn)品銷(xiāo)往全球。
試劑盒儲(chǔ)存要求
本試劑盒所有組分在有效期限內(nèi),于4℃穩(wěn)定保存。為了長(zhǎng)效的實(shí)驗(yàn),1000×儲(chǔ)液請(qǐng)保存于-80℃。
本試劑盒未提供的必需試劑
去離子水或蒸餾水。
濃鹽酸。
量程在5μL至1000μL之間的精密移液管。
量程為50μL和200μL的中繼移液器。
用于稀釋儲(chǔ)液的一次性燒杯。
刻度量筒。
微孔板振蕩器。
吸水紙。
酶標(biāo)l儀,可讀波長(zhǎng)450nm,在570nm至590nm之間應(yīng)有修正。
注意:該溶液有腐蝕性;儲(chǔ)存時(shí)請(qǐng)旋緊瓶蓋
將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會(huì)自然流下去。
液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,混勻液體。也可以用酶l標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。
溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。
洗板時(shí),每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加徹底。沒(méi)有洗板l機(jī)時(shí),倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。