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親和柱原理介紹
親和層析(IAC)可稱為色譜技術(shù),是一種利用抗原特異性可逆結(jié)合特性的SPE技術(shù),根據(jù)抗原的高選擇性,從復(fù)雜的待測樣品中提取目標(biāo)化合物。主要原理是將抗、惰性微珠共價(jià)結(jié)合,然后裝入小柱,將被測溶液流過親和柱,而非目標(biāo)化合物則沿柱流下,然后用洗脫緩沖液洗脫抗原(被測物),從而得到純化的抗原(被測物),收集的抗原樣品液可直接用于 HPLC 分析或處理后用熒光光度計(jì)檢測。
親和柱——親和層析原理
親和層析原理:利用生物分子之間的專一性識(shí)別性或特定的相互作用的分離技術(shù)稱為親和分離技術(shù)。在該技術(shù)中,親和分離過程是通過引入親和配基得以實(shí)現(xiàn)的。所謂親和配基,是指具有對(duì)生物分子專一識(shí)別性或特異相互作用的物質(zhì)。將親和配基固定在不同的介質(zhì)上,可得到不同的親合分離技術(shù),如固定在層析介質(zhì)上,達(dá)到專一性層析分離的技術(shù)稱為親和層析技術(shù)。將親和配基接在分離膜上,得到親和膜分離技術(shù)。
親和柱的應(yīng)用
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◆ 食品、飼料中真菌的測定:見相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)(如GB 5009系列的真菌測定標(biāo)準(zhǔn)方法)、其他行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、地方標(biāo)準(zhǔn)等。
◆ 中藥材中真菌的測定:如《中國藥典》2020版 通則2351 真菌測定法,品種正文中黃曲霉、玉米赤霉烯酮檢查項(xiàng)。
◆ 食品中農(nóng)殘、營養(yǎng)成分等其他檢測項(xiàng)目。
親和柱適用注意事項(xiàng)
(1) 嘔吐毒素對(duì)人體有害,應(yīng)戴手套操作。凡接觸到標(biāo)樣的玻璃器皿都要用5%次酸鈉浸泡過夜。
(2) 不要使用過有效期的親和柱。
(3) 親和柱應(yīng)在2~8℃保存。不要冷凍。
(4) 使用前,親和柱需至少提前半小時(shí)回溫至室溫(25℃左右)。
(5) HPLC液相測定值、試劑盒計(jì)算值接近zui高檢出值時(shí),樣本的實(shí)際含量可能大于柱容量而造成流穿,建議減少上樣體積重新過柱。
(6) 稱取的樣品量以及提取液的體積可根據(jù)實(shí)際情況按比例調(diào)整,建議不少于10g樣。