熒光顯微鏡的工作原理

光源多采用200W的超高壓燈作光源，它是用石英玻璃制作，中間呈球形，工作時由兩個電極間放電，引起蒸發(fā)，球內(nèi)氣壓迅速升高，當完全蒸發(fā)時，可達50~70個標準大氣壓力，這一過程一般約需5~15min。超高壓燈的發(fā)光是電極間放電使分子不斷解離和還原過程中發(fā)射光量的結果。它發(fā)射很強的紫外和藍紫光，足以激發(fā)各類熒光物質，因此，為熒光顯微鏡普遍采用。

超高壓燈也散發(fā)大量熱能。因此，燈室必須有良好的散熱條件，工作環(huán)境溫度不宜太高。

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熒光顯微鏡——物鏡

各種物鏡均可應用，但盡量用消色差的物鏡，因其自體熒光極微且透光性能(波長范圍)適合于熒光。由于圖像在顯微鏡視野中的熒光亮度與物鏡鏡口率的平方成正比，而與其放大倍數(shù)成反比，所以為了提高熒光圖像的亮度，應使用鏡口率大的物鏡。尤其在高倍放大 時其影響非常明顯。因此對熒光不夠強的標本，應使用鏡口率大的物鏡，配合以盡可能低的目鏡。

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熒光顯微鏡——落射光裝置

新型的落射光裝置是從光源來的光射到干涉分光濾鏡后，波長短的部分(紫外和紫藍)由于濾鏡上鍍膜的性質而反射，當濾鏡對向光源呈45。傾斜時，則垂直射向物鏡，經(jīng)物鏡射向標本，使標本受到激發(fā)，這時物鏡直接起聚光器的作用。同時，濾長長的部分(綠、黃、紅等)，對濾鏡是可透的，因此，不向物鏡方向反射，濾鏡起了激發(fā)濾板作用，由于標本的熒光處在可見光長波區(qū)，可透過濾鏡而到達目鏡觀察，熒光圖像的亮度隨著放大倍數(shù)增大而提高，在高放大時比透射光源強。它除具有透射式光源的功能外，更適用于不透明及半透明標本，如厚片、濾膜、菌落、組織培養(yǎng)標本等的直接觀察。研制的新型熒光顯微鏡多采用落射光裝置，稱之為落射熒光顯微鏡。

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熒光顯微鏡的使用方法

以下內(nèi)容由老上光儀器廠為您提供，今天我們來分享熒光顯微鏡的相關內(nèi)容，希望對同行業(yè)的朋友有所幫助！

(1)打開燈源，超高壓燈要預熱15min才能達到高的亮點。

(2)透射式熒光顯微鏡需在光源與暗視野聚光器之間裝上所要求的激發(fā)濾片，在物鏡的后面裝上相應的壓制濾片。落射式熒光顯微鏡需在光路的插槽中插入所要求的激發(fā)濾片、雙色束分離器、壓制濾片的插塊。

(3)用低倍鏡觀察，根據(jù)不同型號熒光顯微鏡的調(diào)節(jié)裝置，調(diào)整光源中心，使其位于整個照明光斑的中央。

(4)放置標本片，調(diào)焦后即可觀察。使用中應注意:未裝濾光片不要用眼直接觀察，以免引起眼的損傷;用油鏡觀察標本時，必須用無熒光的特殊鏡油;高壓燈關閉后不能立即重新打開，需待燈完全冷卻后才能再啟動，否則會不穩(wěn)定，影響燈壽命。

(5)觀察。例如:在熒光顯微鏡下用藍紫光濾光片，觀察到經(jīng)0.01%熒光染料染色的細胞，細胞核和細胞質被激發(fā)產(chǎn)生兩種不同顏色的熒光(暗綠色和橙紅色)。