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目前,傳統(tǒng)的獲得多基因轉(zhuǎn)基因植株的方法包括共轉(zhuǎn)化,再轉(zhuǎn)化W及雜交。但是運 些傳統(tǒng)方法的缺點是共轉(zhuǎn)化的兩個或多個基因的轉(zhuǎn)化效率是不可控的,每個基因在目標基因組的插入位置也是不一樣的,而基因分離會導(dǎo)致不穩(wěn)定的遺傳后代。另外再轉(zhuǎn)化W及雜 交都是耗時的過程。
而為了克服運些缺點,具有單個或者多個轉(zhuǎn)錄盒子的多基因載體應(yīng)運而生并成功 應(yīng)用于多個研究,但是運些多基因表達載體的應(yīng)用沒有得到廣泛的推廣應(yīng)用。因為大部分 的方法需要亞克1隆W至于克1隆所耗時間拉長;沒有標簽或者報告基因與目標基因相連,運 樣就導(dǎo)致蛋白或者基因的鑒定比較困難;另外,某些方法如采用同尾酶構(gòu)建多基因載體的方法受限于可用的酶的數(shù)量不多運個問題。所W構(gòu)建多基因載體需要根據(jù)研究目的而設(shè)計。
蛋白質(zhì)含量測定方法之雙縮脲法(biuret法)
實驗原理雙縮脲(NH3CONHCONH3)是兩個分子脲經(jīng)180℃左右加熱,放出一個分子氨后得到的產(chǎn)物。在強堿性溶液中,雙縮脲與CuSO4形成紫色絡(luò)合物,稱為雙縮脲反應(yīng)。凡具有兩個酰胺基或兩個直接連接的肽鍵,或能過一個中間碳原子相連的肽鍵,這類化合物都有雙縮脲反應(yīng)。
紫色絡(luò)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,而與蛋白質(zhì)分子量及氨基酸成分無關(guān),故可用來測定蛋白質(zhì)含量。測定范圍為1-10mg蛋白質(zhì)。干擾這一測定的物質(zhì)主要有:硫酸銨、tris緩沖液和某些氨基酸等。
此法的優(yōu)點是較快速,不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近,以及干擾物質(zhì)少。主要的缺點是靈敏度差。因此雙縮脲法常用于需要快速,但并不需要十分準確的蛋白質(zhì)測定。