熒光顯微鏡簡介

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熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) : 熒光顯微鏡是以紫外線為光源， 用以照射被檢物體， 使之發(fā)出熒光， 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。

熒光顯微鏡用于研究細胞內物質的吸收、運輸、化學物質的分布及定位等。 細胞中有些物質，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光體染色后，經紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對這類物質進行定性和定量研究的工具之一。

熒光顯微鏡的工作原理

光源多采用200W的超高壓燈作光源，它是用石英玻璃制作，中間呈球形，工作時由兩個電極間放電，引起蒸發(fā)，球內氣壓迅速升高，當完全蒸發(fā)時，可達50~70個標準大氣壓力，這一過程一般約需5~15min。超高壓燈的發(fā)光是電極間放電使分子不斷解離和還原過程中發(fā)射光量子的結果。它發(fā)射很強的紫外和藍紫光，足以激發(fā)各類熒光物質，因此，為熒光顯微鏡普遍采用。

超高壓燈也散發(fā)大量熱能。因此，燈室必須有良好的散熱條件，工作環(huán)境溫度不宜太高。

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熒光顯微鏡——濾色系統(tǒng)

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激發(fā)濾板 根據光源和熒光色素的特點，可選用以下三類激發(fā)濾板，提供一定波長范圍的激發(fā)光。

紫外光激發(fā)濾板:此濾板可使400nm以下的紫外光透過，阻擋400nm以上的可見光通過。

紫外藍光激發(fā)濾板:此濾板可使300~450nm范圍內的光通過。常用型號為ZB-2或ZB-3，外加BG-38。

紫藍光激發(fā)濾板:它可使350~490nm的光通過。常用型號為QB24(BG12)。

大吸收峰在500nm以上者的熒光素(如羅達明色素)可用藍綠濾板(如B-7)激發(fā)。

開始采用金屬膜干涉濾板，由于針對性強，波長適當，因而激發(fā)效果比較玻璃濾更好。

激發(fā)濾板分薄厚兩種，一般暗視野選用薄濾板，亮視野熒光顯微鏡可選用厚一些。

熒光顯微鏡——物鏡

各種物鏡均可應用，但盡量用消色差的物鏡，因其自體熒光極微且透光性能(波長范圍)適合于熒光。由于圖像在顯微鏡視野中的熒光亮度與物鏡鏡口率的平方成正比，而與其放大倍數成反比，所以為了提高熒光圖像的亮度，應使用鏡口率大的物鏡。尤其在高倍放大 時其影響非常明顯。因此對熒光不夠強的標本，應使用鏡口率大的物鏡，配合以盡可能低的目鏡。

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