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博日食品加工企業(yè)核酸提取純化常用解決方案「多圖」

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發(fā)布時(shí)間:2020-07-30 08:00  






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據(jù)介紹,該發(fā)明公開了一種非洲病毒 CP530R 基因的熒光 PCR 檢測(cè)試劑及其制備方法與用途,設(shè)計(jì)合成了一套特異性的引物及 Taqman 探針和陽性對(duì)照,并利用該引物及探針建立了一種快速簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、靈敏度高的熒光 PCR 檢測(cè)體系,可在 3~4 小時(shí)內(nèi)從被檢樣本中快速、準(zhǔn)確、特異、安全、簡(jiǎn)便地檢出 ASFV CP530R 基因,可用于來自家豬、和軟蜱的各種樣本中微量非洲病毒CP530R 基因的檢測(cè)。隨著生物芯片技術(shù)和熒光探針定量技術(shù)的結(jié)合,熒光定量PCR在醫(yī)學(xué)檢測(cè)及其他各個(gè)領(lǐng)域中的應(yīng)用前景將更加廣闊,令人欣喜。

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非洲 ( ASF ) 是由非洲病毒 ( ASFV ) 引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳i染病。從 20 世紀(jì) 60 和 70 年代i開始 ASF 由非洲蔓延至歐美地區(qū),2007 年格魯吉亞、亞美尼亞、阿塞拜疆和俄羅斯都出現(xiàn)了大面積流行,2018年8月也開始在我國(guó)快速蔓延開來,對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展構(gòu)成巨大威脅。96孔板比較方便,加完樣品后只需附上一層膜,用它自帶的板子撫平即可。因此,本方法為快速診斷非洲病毒,提供了有力的技術(shù)手段。



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熒光定量PCR樣品RNA的抽提①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯i仿,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。如測(cè)定病i人樣本中病原體的含量、實(shí)驗(yàn)樣本中某一特定的mRNA的含量等。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯i仿相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。

廣州勱博--養(yǎng)豬場(chǎng)檢測(cè)

近年來,分子遺傳學(xué)診斷技術(shù)發(fā)展迅速,熒光定量PCR(QF-PCR)技術(shù)、熒光原位雜交(FISH)技術(shù)、多重連接探針擴(kuò)增(MLPA)技術(shù)、實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)、染色體微陣列分析(CMA)技術(shù)、產(chǎn)前液相芯片(BoBs)技術(shù)、無創(chuàng)性產(chǎn)前基因檢測(cè)(NIPT)等已逐漸成熟,并開始向臨床轉(zhuǎn)化。分子遺傳學(xué)診斷技術(shù)多以遺傳物質(zhì)DNA為檢測(cè)對(duì)象,不需要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),為傳統(tǒng)的細(xì)胞染色體核型分析技術(shù)提供了有效的補(bǔ)充。盡管如此我們也應(yīng)清晰認(rèn)識(shí)到,F(xiàn)Q-PCR技術(shù)在我國(guó)各個(gè)研究領(lǐng)域的應(yīng)用并不多見,這就需要我國(guó)學(xué)者迎頭趕上,使FQ-PCR技術(shù)更充分地i推廣,以推動(dòng)研究工作的快速發(fā)展。


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廣州勱博--冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠非洲病毒檢測(cè)

FQ-PCR在醫(yī)學(xué)栓測(cè)中有價(jià)值的應(yīng)用領(lǐng)城就是對(duì)感i染性疾病的診斷,只要有限的核酸序列清楚,運(yùn)用FQ-PCR技術(shù),檢測(cè)任何病原體。廣州勱博--屠宰場(chǎng)熒光定量PCR擴(kuò)增序列特異性檢測(cè)方法是在PCR反應(yīng)中利用標(biāo)記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測(cè)產(chǎn)物,它又可分為直接法和間接法。目前,對(duì)一些培養(yǎng)周期長(zhǎng)或缺乏穩(wěn)定可靠的檢測(cè)手段的病原體,可以考慮用FQ-PCR檢測(cè),為臨床診斷提供依據(jù)FQ-PCR對(duì)病原體的檢測(cè)克服了免i疫學(xué)檢測(cè)的“窗口期“問題,可判斷疾病是否隱性或亞臨床狀態(tài)。FQ-PCR技術(shù)可以應(yīng)用于腫癟的研究及診斷。

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實(shí)時(shí)熒光定量PCR的基本原理:理論上,PCR過程是按照2n(n代表PCR循環(huán)的次數(shù))指數(shù)的方式進(jìn)行模板的擴(kuò)增。生產(chǎn)上常見到的則是不經(jīng)計(jì)算,只是在消毒i藥將舍內(nèi)全部噴濕即可,人走后地面馬上干燥,這樣的消毒效果是很差的,因?yàn)橄緄藥無法與掩蓋在深層的病原接觸。但在實(shí)際的PCR反應(yīng)過程中,隨著反應(yīng)的進(jìn)行由于體系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰減)使得靶序列并非按指數(shù)方式擴(kuò)增,而是按線性的方式增長(zhǎng)進(jìn)入平臺(tái)期。因此在起始模板量與終點(diǎn)的熒光信號(hào)強(qiáng)度間沒有可靠的相關(guān)性。如采用常規(guī)的終點(diǎn)檢測(cè)法(利用EB染色來判斷擴(kuò)增產(chǎn)物的多少,從而間接的判斷起始拷貝量),即使起始模板量相同經(jīng)PCR擴(kuò)增、EB染色后也完全有可能得到不同的終點(diǎn)熒光信號(hào)強(qiáng)度。



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非洲(African Swine fever,ASF)是由非洲病毒(African Swine fever virus,ASFV)感i染家豬和各種(非洲、歐洲等)引起一種急性、出i血性、烈性傳i染病。在傳統(tǒng)的PCR中,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測(cè)PCR反應(yīng)的最終擴(kuò)增產(chǎn)物,因此用此終點(diǎn)法對(duì)PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報(bào)告動(dòng)物疫病,該病也是我范的一類動(dòng)物疫情。其特征是發(fā)病過程短,急性和急性i感i染死i亡率高達(dá)100%,臨床表現(xiàn)為發(fā)熱(達(dá)40~42℃),心跳加快,呼吸困難,部分咳嗽,眼、鼻有漿液性或粘液性膿性分泌物,皮膚發(fā)紺,淋巴i結(jié)、、胃腸粘膜明顯出血,非洲臨床癥狀與癥狀相似,只能依靠實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)確診。

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非洲是一種傳i染性強(qiáng),危害嚴(yán)重的豬感i染病毒性疾病。非洲病毒(ASFV)通過直接或間接接觸傳播,在豬群眾傳播速度極快。如果生產(chǎn)者認(rèn)可排除豬源原料是可行的,那么還應(yīng)該考慮到那些間接的豬源原料,像添加劑、基礎(chǔ)混合物和那些可能源于豬源的動(dòng)物蛋白或脂肪等。而且,該病毒在未經(jīng)烹飪的生豬相關(guān)制品中存活時(shí)間很長(zhǎng),這一特點(diǎn)使得非洲容易向未感i染區(qū)域傳播。由于非洲可以感i染,而軟蜱通過叮咬成為非洲主要傳播途徑之一,這也給非洲的凈化帶來難度。非洲的感i染致死率極高,接近100%,并且目前沒有有效的疫i苗和治i療手段。PCR技術(shù)在傳i染病診斷上具有廣泛的應(yīng)用,該技術(shù)靈敏度高,特異性強(qiáng),能夠在豬、豬產(chǎn)品及環(huán)境中病毒的“蹤跡”進(jìn)行有效的監(jiān)控,是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部指i定的非洲首i選診斷技術(shù)。


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