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發(fā)布時間:2020-07-31 14:18  






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一般情況下,高溫消毒時,60℃就可以將多數(shù)病原殺滅,但汽i油噴燈溫度達幾百度,噴燈火焰一掃而過,也不會殺滅病原,因時間太短。96孔板比較方便,加完樣品后只需附上一層膜,用它自帶的板子撫平即可。蒸煮消毒:在水開后30分鐘卻可以將病原殺i死。紫外線照射:必須達到5分鐘以上。注意:這里說的時間,不單純是消毒所用的時間,更重要的是病原體與消毒i藥接觸的有效時間。因為病原體往往附著于其他物質(zhì)上面或中間,消毒i藥與病原接觸需要先滲透,而滲透則需要時間,有時時間會很長。

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消毒i藥在殺滅病原的同時往往自身也被破壞,一個消毒i藥分子可能只能殺i死一個病原,如果一個消毒i藥分子遇到五個病原,再好的消毒i藥也不會有效果。在real-time技術(shù)的發(fā)展過程中,兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用:(1)在90年代早期,TaqDNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn),它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。關(guān)于消毒i藥的用量,一般是每平方米面積用1升藥液。生產(chǎn)上常見到的則是不經(jīng)計算,只是在消毒i藥將舍內(nèi)全部噴濕即可,人走后地面馬上干燥,這樣的消毒效果是很差的,因為消毒i藥無法與掩蓋在深層的病原接觸。


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豬肉制品加工企業(yè)、生豬產(chǎn)品經(jīng)營者采購生豬產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)批批查驗其動物檢疫合格證明、肉品品質(zhì)檢驗合格證明以及非洲病毒檢測結(jié)果(報告),確保購進的生豬產(chǎn)品不帶非洲病毒;采購的進口生豬產(chǎn)品應(yīng)附有合法的入境貨物檢驗檢疫合格證明。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴增曲線圖。不得采購沒有非洲病毒檢測結(jié)果(報告)及未經(jīng)檢疫或者檢疫不合格的生豬產(chǎn)品,確保豬肉制品和經(jīng)營的生豬產(chǎn)品不含非洲病毒。

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所謂real-time Q-PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。在相對定量中,其前提是假設(shè)內(nèi)源控制物不受實驗條件的影響的,合理地選擇合適的不受實驗條件影響的內(nèi)源控制物也是實驗結(jié)果可靠與否的關(guān)鍵。在real-time 技術(shù)的發(fā)展過程中,兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用:(1)在90年代早期,Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn),它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。(2)此后熒光雙標(biāo)記探針的運用使在一密閉的反應(yīng)管中能實時地監(jiān)測反應(yīng)全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運用。



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非洲病毒的附著力到底有多強?直接接觸或者攜帶病毒的物品再次傳播的能力有多強?尚不清晰。目前已知非洲是高度接觸性傳播的急性、烈性i病毒,主要通過接觸或采食受非洲病毒污染的物品,以及通過昆蟲吸血而傳i染。(3)目前real-timeQ-PCR實驗成本比較高,從而也限制了其廣泛的應(yīng)用。短距離可經(jīng)空氣傳播、污染的飼料、泔水、剩菜及肉屑、欄舍、車輛、器具和衣服等均可間接傳播本病。而且目前公認(rèn)ASFV對外界的抵抗力強,在自然條件下可以長時間保持感i染性,可以在血液、糞便和各種組織中長期保持感i染性。含有病毒的血液是該病發(fā)生傳播的重要因素。

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非洲(African Swine Fever,ASF)是由非洲病毒(African Swine Fever Virus,ASFV)引起的一種急性、烈性、高度接觸性傳i染病,致死率100%。相比其他環(huán)節(jié),在生豬屠宰廠(場)開展檢測更容易采集樣品,實現(xiàn)最i大限度的檢測覆蓋面,結(jié)合臨床和剖檢情況綜合判斷。自2018年8月寧省沈陽市發(fā)生第i一起非洲i疫情起,目前全國已有29個省115個地方發(fā)生非洲i疫情,已撲殺數(shù)百萬頭生豬,直接經(jīng)濟損失數(shù)百億元。目前全世界都沒有有效的非洲i疫i苗進行預(yù)防,現(xiàn)在有效的防控方法仍然是對非洲病毒進行檢測,根據(jù)檢測結(jié)果,對發(fā)生疫情的地方嚴(yán)防死守,對疫點地區(qū)生豬全部撲殺,進行無害化處理,防止疫情的擴散。


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根據(jù)動物防疫法及其配套規(guī)章規(guī)定,縣級動物衛(wèi)生監(jiān)督機構(gòu)依法向屠宰場派駐(出)官i方獸醫(yī)實施屠宰檢疫。②操作簡單、用時短,整個提取流程只有四步,大多可以在36-40分鐘內(nèi)完成。按照生豬屠宰檢疫規(guī)程和相關(guān)規(guī)定,屠宰檢疫內(nèi)容包括傳i染病和寄i生蟲病,檢疫流程包括生豬進入屠宰廠(場、點)監(jiān)督查驗、檢疫申報、宰前檢查、同步檢疫、檢疫結(jié)果處理以及檢疫記錄等。在非洲防控期間,官i方獸醫(yī)監(jiān)督屠宰企業(yè)開展非洲自檢,對沒有開展自檢的屠宰企業(yè),對屠宰后的生豬產(chǎn)品一律不得出具動物檢疫證明。

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實時熒光定量PCR(real-time quantitativePCR)/QRT-PCR,是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記物,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過擴增曲線對未知模板進行定量分析的方法。PCR檢測雖不需要熒光顯微設(shè)備,但也需要相關(guān)設(shè)備,可以代替病毒分離鑒定的一種靈敏、特異、快速非瘟檢測技術(shù)。一般用于mRNA轉(zhuǎn)錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數(shù)的測定、基因芯片結(jié)果驗證、藥i效分析等。金開瑞采用SYBR熒光染料法及TaqMan探針法進行熒光定量PCR檢測,從引物設(shè)計到檢測一次性完成,提供2種常用的內(nèi)參引物及免費的專業(yè)數(shù)據(jù)分析,每個樣品設(shè)置至少三個平行對照,保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。


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