酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

操作步驟1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4. 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

哺乳動物細胞溶質(zhì)中的SOD呈綠色，并且由兩種亞單位構成，一種含有銅，另一種含有鋅（Cu/Zn-SOD）。線粒體和細菌SOD為紅紫色并含有錳（Mn-SOD）。E.coli含有Mn-SOD和Fe-SOD。為了測定SOD的活性，研究人員嘗試了許多間接的或者直接的方法，其中，NBT的間接法為常用，因為它很方便。但是，NBT法有幾個缺點，例如生成的染料水溶性差，而且會和氧化酶的還原型發(fā)生反應。雖然cytochrome C法也常被用來做SOD檢測，但它和超氧化物反應過于劇烈，不能測定低水平的SOD。