組成編輯完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：(1)已包被抗原或的固相載體(吸附劑)；(2)酶標(biāo)記的抗原或(結(jié)合物)；(3)酶的底物；(4)陰性對(duì)照品和陽性對(duì)照品(定性測(cè)定中)，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制(定量測(cè)定中)；(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；(6)洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；(7)酶反應(yīng)終止液，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的終體積而異，在板式ELISA中一般采用3mol/L。



ELISA的基礎(chǔ)是抗原或的固相化及抗原或的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或仍保持其學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或既保留其學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的或抗原）與固相載體表面的抗原或起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。蘇州夢(mèng)犀生物科技有限公司蘇州夢(mèng)犀生物科技有限公司



間接法1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；2.次日洗滌3次；3.加一定稀釋的待檢樣品（未知）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；4.（同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二（抗）0.1ml；5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；6.’后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙夾心法”的4、5、6。

注意事項(xiàng)1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產(chǎn)品。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。