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廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。一般用于mRNA轉(zhuǎn)錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數(shù)的測定、基因芯片結(jié)果驗證、藥i效分析等。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。
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豬肉制品加工企業(yè)、生豬產(chǎn)品經(jīng)營者采購生豬產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)批批查驗其動物檢疫合格證明、肉品品質(zhì)檢驗合格證明以及非洲病毒檢測結(jié)果(報告),確保購進的生豬產(chǎn)品不帶非洲病毒;采購的進口生豬產(chǎn)品應(yīng)附有合法的入境貨物檢驗檢疫合格證明。不得采購沒有非洲病毒檢測結(jié)果(報告)及未經(jīng)檢疫或者檢疫不合格的生豬產(chǎn)品,確保豬肉制品和經(jīng)營的生豬產(chǎn)品不含非洲病毒。研究表明,每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系,起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。
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所謂real-time Q-PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在real-time 技術(shù)的發(fā)展過程中,兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用:(1)在90年代早期,Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn),它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。(2)此后熒光雙標記探針的運用使在一密閉的反應(yīng)管中能實時地監(jiān)測反應(yīng)全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運用。PCR擴增時,Taq酶的5’端-3’端外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。
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非洲為何難以控制?分子遺傳學(xué)診斷技術(shù)多以遺傳物質(zhì)DNA為檢測對象,不需要進行細胞培養(yǎng),為傳統(tǒng)的細胞染色體核型分析技術(shù)提供了有效的補充。非洲病毒基因組全長 170~190 kb,為有囊膜的雙鏈 DNA 病毒,病毒粒子大小為 175~215 nm,呈正二十面體結(jié)構(gòu),也是唯i一的蟲媒DNA病毒。非洲病毒是一種急性、熱性、高度接觸性傳i染病,引起豬的死i亡率可達100%,并且非洲具有潛伏期,即使感i染病毒,但沒有臨床癥狀,就有可能通過非實驗室檢驗技術(shù)關(guān)卡流入市場,進而導(dǎo)致下游食品企業(yè)相關(guān)問題的出現(xiàn)。
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非洲與傳統(tǒng)相似且綜合癥狀復(fù)雜難辨,臨床上類似于急性,表現(xiàn)為高熱、皮膚充血、流i產(chǎn)、水腫和臟器出血。我國因之前不屬于非洲i疫情國家,因此沒有相關(guān)的針對性研究,目前采用的是原農(nóng)i業(yè)部檢疫所于1997年與美國梅島動物病研究所共同研究的檢測方法,主要是PCR和ELISA,標準遵循GB/T 18648-2002非洲診斷技術(shù)。隨著相關(guān)檢測技術(shù)的發(fā)展,對于非洲的檢測方法也更加完善。PCR技術(shù)是目前i簡單、快速的分子學(xué)檢測方法,但該方法的敏感性有限,因此以PCR為基礎(chǔ)的更新方法應(yīng)運而生。因為病原體往往附著于其他物質(zhì)上面或中間,消毒i藥與病原接觸需要先滲透,而滲透則需要時間,有時時間會很長。
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相對定量可以對每個樣本中模版的其實水平之間的差異進行精i確比較,沒必要知道模版的確切拷貝數(shù),并且樣本模板中的相對水平不用使用標準曲線就可以確定。相對定量分析以實時PCR方式執(zhí)行,在實時PCR分析過程中,PCR基因擴增一直在監(jiān)控中,在PCR進行期間進行數(shù)據(jù)采集,而不是在PCR結(jié)束時(終點PCR)才獲取數(shù)據(jù)。在實時PCR中,反應(yīng)是在目標的擴增早被監(jiān)測到時用循環(huán)中的時間點來描述的,而不是在PCR結(jié)束時通過目標的累計數(shù)來描述。相比其他環(huán)節(jié),在生豬屠宰廠(場)開展檢測更容易采集樣品,實現(xiàn)最i大限度的檢測覆蓋面,結(jié)合臨床和剖檢情況綜合判斷。
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在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。復(fù)檢為陽性的,企業(yè)要在當(dāng)?shù)厥袌霰O(jiān)管、畜牧獸醫(yī)部門監(jiān)督下,按規(guī)定對同批次生豬產(chǎn)品原料進行無害化處理,對相關(guān)場所進行徹i底清洗消毒。