Cell Counting Kit-8（簡稱CCK-8）是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的檢測試劑。WST-8【化學名：2-(2-甲氧ji-4-硝ji苯ji)-3-(4-硝ji苯ji)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，是一種類似于MTT的化合物，它在電子載體1-甲氧ji-5-甲ji吩嗪鎓硫酸二jia酯（1-Methoxy PMS）存在的情況下，被線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲瓚產物（formazan）。共培養(yǎng)-定時間后進行破骨細胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistantacidphosphatase,TRAP染色鑒定和骨吸收功能檢測，并進一步采用RT-PCR對破骨細胞標志酶基因基質金屬蛋白酶。細胞增殖越多越快，顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺，對于同樣的細胞，顏色的深淺與活xi胞的數量成正比，因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。

自噬(autophagy)是細胞受到刺激后吞噬自身的細胞質或細胞器，終將吞食物在溶酶體內降解的過程,自噬體(autophagosome)為雙層膜包被的圓形或橢圓形結構,內含細胞質、長壽蛋白質和異常蛋白聚集物，損傷或多余細胞器如線粒體、粗面內質網和微體、

病毒和細菌等。單丹磺酰尸胺(Dansylcadaverine,MDC是一種熒光色素，是嗜酸性染色劑，通常被于檢測自噬體形成的特異性標記染色劑,其檢測激發(fā)濾光片波長355nm ,阻斷濾光片波長512nm。分離和富集精原gan細胞成為精原gan細胞體外培養(yǎng)能否成功的前提條件。Leagene MDC染色液適用于培養(yǎng)細胞的自噬染色，可與EB合用雙染。

血管生成技術

一、服務介紹

zhong瘤血管生成是一個極其復雜的過程，一般包括包括血管內皮基質降解、內皮細胞移行、內皮細胞增殖、內皮細胞管道化分支形成血管環(huán)和形成新的基底膜等步驟。7%兩個濃度的低溶點瓊脂糖液，高壓滅菌后，維持在40日中不會凝固。由于zhong瘤組織這種新生血管結構及功能異常，且血管基質不完善，這種微血管容易發(fā)生滲漏，因此腫liu細胞不需經過復雜的侵襲過程而直接穿透到血管內進入血流并在遠隔部位形成轉移。

血管生成（Angiogenesis）是指源于已存在的mao細血管和毛xi血管后微靜脈新的mao細血管性血管的生長。無論原發(fā)性zhong瘤還是繼發(fā)性zhong瘤，一旦生長直徑超過1~2 mm，都會有血管生成。3D細胞培養(yǎng)3D多細胞腫liu球是在體外應用組織培養(yǎng)方法使腫liu細胞以多細胞集聚體的形式生長成為具有三維結構的球體。這是由于zhongt瘤細胞自身可分泌多種生長因子，誘導血管生成。

大鼠主動脈內皮細胞的分離培養(yǎng)

方法：分離大鼠主動脈,直接貼壁于培養(yǎng)皿中,熒光倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài),免yi組化Ⅷ因子相關抗原染色鑒定細胞.結果:約24小時組織塊邊緣有游離的 新生細胞長出,7天即融合成片.消化傳代后細胞呈短梭形或三角形,單層生長,鋪路石狀,Ⅷ因子表達陽性,呈指數增殖.凍存后復蘇細胞活性均超過90%.結 論:用貼壁法成功建立了大鼠血管內皮細胞體外培養(yǎng)方法,凍存細胞存活率高,為體外研究提供了穩(wěn)定的模型.