分子實(shí)驗(yàn)介紹——熒光檢測(cè)

細(xì)胞熒光染色是以熒光物質(zhì)標(biāo)記而進(jìn)行抗原定位的技術(shù)。在細(xì)胞中，通過(guò)特定的標(biāo)記，可以檢測(cè)目的蛋白表達(dá)量和表達(dá)定位。是細(xì)胞中的可直觀觀察細(xì)胞內(nèi)蛋白定位和表達(dá)的實(shí)驗(yàn)方法。

實(shí)驗(yàn)流程：細(xì)胞固定-細(xì)胞膜破膜-蛋白封閉-目的蛋白結(jié)合-熒光二抗結(jié)合-DAPI染色-熒光顯微鏡拍照或激光共聚焦顯微鏡拍照。

結(jié)果示例：

細(xì)胞熒光染

通過(guò)觀察細(xì)胞中蛋白的熒光強(qiáng)度和定位分析該蛋白的表達(dá)變化。

分子生物學(xué)服務(wù)

 公司建有100平米分子實(shí)驗(yàn)室，配備有PCR儀、定量PCR儀、電泳儀、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫?fù)u床、垂直電泳儀、蛋白轉(zhuǎn)印儀、蛋白發(fā)光成像儀等設(shè)備。除了文中提到了三個(gè)主流平臺(tái)，外顯子組捕獲方面的新產(chǎn)品也在不斷推出，研究人員的選擇也將更廣泛。分子組技術(shù)人員畢業(yè)于中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)、華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院、浙江理工大學(xué)等高校生物醫(yī)學(xué)相關(guān)，全部具有碩士研究生以上學(xué)歷，熟練掌握分子生物學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)，可開(kāi)展多種分子生物學(xué)檢測(cè)服務(wù)。

分子實(shí)驗(yàn)室部分設(shè)備

RNA pull down 檢測(cè)

RNA   pull down：RNA沉淀檢測(cè)，是檢測(cè)RNA結(jié)合蛋白與其靶RNA之間相互作用的主要實(shí)驗(yàn)方法之一。全轉(zhuǎn)錄組測(cè)序全轉(zhuǎn)錄組是指特定組織或細(xì)胞在特定狀態(tài)下所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的總和，包括mRNA和各種noncodingRNA。使用體外轉(zhuǎn)錄將RNA進(jìn)行生物素標(biāo)記，并與細(xì)胞蛋白裂解液孵育，形成RNA-蛋白復(fù)合物。復(fù)合物通過(guò)磁珠結(jié)合后分離，復(fù)合物純化洗脫后通過(guò)Western blot驗(yàn)證檢測(cè)特性的蛋白。若篩選可能結(jié)合的蛋白通過(guò)質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)篩選。

二、操作步驟：

1. 所有在純化系統(tǒng)里使用的溶液當(dāng)日都需要經(jīng)過(guò) 0.22μm 的濾膜抽濾、脫氣處理；保存 4℃ 冰箱里的緩沖液若要在室溫使用需恢復(fù)至室溫后抽濾脫氣；

2. 樣品上柱純化前，需先濾膜過(guò)濾，少量樣品可用離心（13000rpm，10min）；

3. 依次用水、緩沖液洗泵；設(shè)置流速和柱前警報(bào)壓（壓力值參閱層析柱及填料說(shuō)明書(shū)，取較小的一個(gè)大耐受壓力）。防止柱中進(jìn)入氣泡，影響分離效果；

4. 當(dāng)柱子限壓在 0.3MPa，或者在限壓狀態(tài)下流速很低時(shí)，pH valve 中的 Restirtor 可以切換成 Off line，即顯示 By-pass 狀態(tài)；

5. 當(dāng)需要通過(guò)儀器上樣環(huán)上樣時(shí)，將 W1 閥口處換成帶透明短軟管的閥門(mén)，從此處閥門(mén)位通過(guò)倒吸樣品上樣；

6. 進(jìn)樣閥「Inject」為上樣狀態(tài)。上樣結(jié)束可將進(jìn)樣閥切換回「Load」?fàn)顟B(tài)。并用純水認(rèn)真清洗上樣環(huán)至少 3 次；將 W1 閥口處換回原來(lái)接頭閥門(mén)。

7. 純化結(jié)束后，用純水清洗泵和平衡柱子；再用 20% 的乙醇清洗泵以及系統(tǒng)。長(zhǎng)期不用，層析柱應(yīng)保存在 20% 的乙醇中，泵放置在 20% 乙醇中；

8. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后及時(shí)傾倒廢液瓶里的廢液；