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在各種致病因素作用下,大腦實質(zhì)受到損傷后可出現(xiàn)神經(jīng)功能改變,如偏癱、平衡失調(diào)等。
對于神經(jīng)系統(tǒng)疾病動物模型而言,造模結(jié)束只是步,驗證個體模型是否成功是第二步,而控制組內(nèi)個體特征一致性是第三步。
采用神經(jīng)功能評分是重要的觀察指標,可以用來在體評價模型是否成功或者病變嚴重程度。盡量控制動物模型的評分一致性是很困難但不得不做的一件事。
這里介紹三種常見的嚙齒類神經(jīng)功能評分方法。
一、【Longa評分法】
① 無神經(jīng)功能缺陷:0分;
②癱瘓側(cè)前爪不能完全伸展:1分;
③行走時向癱瘓側(cè)轉(zhuǎn)圈:2分;
④行走時向癱瘓側(cè)傾倒:3分;
⑤不能自動行走,存在意識喪失現(xiàn)象:4分。
二、【Bederson評分法】
抓起動物的尾巴,使動物離臺面10cm高。此時,正常大鼠的前爪處于伸直狀態(tài),而存在神經(jīng)功能病變的動物則可出現(xiàn)如下表現(xiàn):
②動物尾巴提起后,癱瘓側(cè)前肢回收并屈于腹下,而正常側(cè)肢體伸向臺面:1分;
③除第二條表現(xiàn)以外,俯臥于臺面時向癱瘓側(cè)側(cè)推動物的阻力較正常側(cè)明顯降低:2分;
④除條和第二條以外,動物行走時向癱瘓側(cè)旋轉(zhuǎn):3分。
三、【平衡木評分法】
一根長為80cm、寬為2.5cm的木條,水平固定在離臺面10cm高度的地方,然后讓動物在木條上行走。
①能跳上平衡木條,可以自由行走但不跌倒:0分;
②能跳上平衡木條,動物在上面行走會跌下,但跌下的機會小于50%:1分;
③能跳上平衡木條,動物在上面行走會跌下,但跌下的機會大于50%:2分;
④動物在正常側(cè)身體的幫助下可以跳上平衡木條;但是癱瘓側(cè)的后肢不能夠幫助身體向前移動:3分;
⑤動物無法在平衡木條上行走,但是可以坐在木條上:4分;
⑥將動物放在木條上,動物很快會掉落下來:5分。
難點與關(guān)鍵點
將灌注針插入主動脈內(nèi)是灌注固定的關(guān)鍵,也是難點。首先準確找到主動脈,這是此步驟的要點??捎脺厣睇}水將胸腔內(nèi)的血液沖洗干凈,用鑷子輕輕夾住心 外膜(夾的越少越好,以免影響取材)將心臟向左上方提起,即可看清主動脈,又可使灌注針很容易地插入主動脈內(nèi)。插入時動作要慢,針尖方向不要偏向右側(cè),以 免刺入右心房,如果感到有阻力,則將針退后、調(diào)整方向重新進針,直到進入主動脈,灌注針進入主動脈后可在心臟的上方看到其位置,灌注針進入主動脈的長度 好為 3~5 毫米,然后用絲線扎緊。切勿將灌注針放在左心室內(nèi),這樣由于主動脈瓣的關(guān)閉,灌注液很難進入主動脈,而是沿著心室的切口流出,致使灌注失敗。另 外,灌注針插入成功后,一定要用剪刀剪開右心耳而不是右心室,這是灌流液的出口。剪開心尖的位置一定要掌握好,不能偏右使灌注針插入右心室。
5. 剝奪桿睡眠剝奪法
在標準實驗室籠中采用間隙性的剝奪桿掃描進行觸覺刺激來干擾自由行為的小鼠。該方法防止了人類接觸和干預(yù)對睡眠剝奪的影響,并且在整個睡眠剝奪過程期間小化身體活動。此外,該程序準確且可預(yù)測。實驗室動物從小都是在飼養(yǎng)籠中長大,基于實驗室飼養(yǎng)籠使得動物能夠保持在正常的社會環(huán)境中實施了一種相對無壓力的方法來誘導(dǎo)動物睡眠剝奪模型,從而避免了外界環(huán)境及其他因素對睡眠剝奪的影響。此外,基于飼養(yǎng)籠式的睡眠剝奪儀易于組裝和清洗,設(shè)計更加地人性化。