細胞實驗介紹——細胞運動能力檢測：

細胞劃痕實驗是體外模擬細胞遷移能力和修復能力快捷的檢測方法。在長滿的細胞培養(yǎng)板或者培養(yǎng)皿中，沿著中線使用移液器槍頭或者其他硬物劃1-3條平行的直線，去除中線的細胞，細胞在0h、12h、24h后，觀察細胞往中線遷移情況，判斷細胞遷移能力。

一般流程：細胞接種培養(yǎng)-劃痕-不同時間點拍照

細胞遷移和侵襲實驗是體外模擬細胞遷移和侵襲能力的檢測方法。使用不同孔徑的聚碳酸酯膜transwell小室放入培養(yǎng)板中，將細胞接種于小室中，利用培養(yǎng)液成分的差異誘導細胞運動，檢測細胞的遷移和侵襲能力的差異。

一般流程：transwell小室準備-細胞接種-細胞培養(yǎng)-transwell小室染色-顯微鏡拍照

結果示例：

                                       圖 A 細胞劃痕實驗圖；B，C 細胞遷移和侵襲實驗圖

細胞培養(yǎng)中常見的污染及解決方法

黑點污染

黑色的游動點能穿透濾膜并在空氣中擴散。它們在低倍鏡下顯示為黑色圓點，在高倍鏡下顯示為可移動的黑點。培養(yǎng)液也不渾濁，一般影響較小，因此細胞仍可使用。通常，黑點污染后，細胞生長良好，運動物體無明顯增加，培養(yǎng)基的顏色和透明度無明顯變化。細胞沉淀用15mlMEF生長培養(yǎng)基重懸后進行細胞計數(shù)(--般8只14天的胎鼠可獲得2-3x107細胞)。在同一批培養(yǎng)的細胞中也可以發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象。

解決方法：黑點對細胞生長狀態(tài)沒有明顯影響，細胞增殖后會自然消失，因此除了置換外，無需特殊處理。如果細胞可能被小的運動點污染，建議增加培養(yǎng)皿細胞密度，以提高細胞存活率。

什么是脂質體？脂質體轉染的原理和步驟？

細胞轉染的方法主要包括：電穿孔法、顯微注射、基因槍、磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染法、多種陽離子物質介導、病毒介導的轉染等，理想的細胞轉染方法是具有高轉染效率、對細胞的毒性作用小等。

一、脂質體 (liome) 轉染方法原理

脂質體 (liome) 轉染方法原理：脂質體 ((Iiome) 作為體內和體外輸送載體的工具，已經研究的十分廣泛，用合成的陽離子脂類包裹 DNA，同樣可以通過融合而進入細胞。使用脂質體將 DNA 帶入不同類型的真核細胞，與其它方法相比，有較高的效率和較好的重復性的。2%的瓊脂糖和2xDMEM培養(yǎng)基(含有2x和20%的小牛血l清)混合后，取3mL混合液注入直徑6cm平皿中(10cm平皿加7~10mL)，冷卻凝固，可作底層瓊脂置CO2溫箱中備用。

中性脂質體是利用脂質膜包裹 DNA，借助脂質膜將 DNA 導入細胞膜內。帶正電的陽離子脂質體，DNA 并沒有預先包埋在脂質體中，而是帶負電的 DNA 自動結合到帶正電的脂質體上，形成 DNA-陽離子脂質體復合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經過內吞被導入細胞。實驗流程：慢病毒質粒構建-HEK293T細胞培養(yǎng)-質粒轉染293T細胞-病毒收集-病毒純化-病毒滴度檢測-細胞-穩(wěn)轉細胞篩選-穩(wěn)轉細胞鑒定結果示例：圖A病毒滴度檢測。

細胞凍存有哪些注意事項？

細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是的。而經過雜交瘤測序，可以獲得相應的序列，可以以重組蛋白的方式來穩(wěn)定獲得。

細胞凍存的步驟：

配制含 10%DMSO 或甘油、10~20% 小牛的凍存培養(yǎng)液;

取對數(shù)生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用 PBS 清洗。

去除 PBS，加入適量胰蛋白酶 (覆蓋培養(yǎng)皿表面) 把單層生長的細胞消化下來;

離心 1000rpm，5min;

去除胰蛋白酶，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調節(jié)凍存液中細胞的終密度為 5×106/ml~1×107/ml;

將細胞分裝入凍存管中，每管 1~1.5 ml;

在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者;

凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/ min;當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱 2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內。細胞誘導是指將一群不同類型或者形態(tài)結構、功能特征存在差異的細胞通過生物學、物理學等手段，將之轉變?yōu)榫哂邢嗨?相同形態(tài)結構、功能特征的細胞群體的過程。