細胞檢測服務(wù)

作為生物體結(jié)構(gòu)和功能的基本單位，細胞在機體的各項新陳代謝的生命活動中發(fā)揮著重要的作用，與此同時，細胞的生理過程，在一定程度上也是機體生命活動的反應。因此利用多種精密儀器，結(jié)合特異性的檢測試劑，對體外培養(yǎng)的細胞直接檢測其增殖的基本過程，或?qū)毎M行不同的處理后檢測細胞生活周期內(nèi)各項指標的變化，從而深入揭示細胞新陳代謝的具體機制。(4)緩慢將細胞懸液加入預先裝有5mL淋巴細胞分離液的15mL離心管內(nèi)，保持細胞懸液在淋巴細胞分離液上層，注意不要攪動液面,保持二者分層界面。

BrdU染色原理

 BrdU (5-脫氧尿核苷)是胸腺的衍生物，常用于標記中新合成的DNA,可代替胸腺選擇性整合到細胞中新合成的DNA中(細胞周期S期)。這種摻入可以穩(wěn)定存在，隨著DNA進入子細胞中BrdU特異性可以用于檢測BrdU的摻入，從而判斷細胞的增殖能力。BrdU特異性可以用于檢測BrdU的摻入，從而判斷細胞的增殖能力。透射電鏡觀察自噬小體方法利用光學顯微鏡，借助相應的染色方法，可以觀察細胞凋亡時會出現(xiàn)的一系列形態(tài)特征。

注射或細胞培養(yǎng)后利用抗Brdu單，ICC染色，顯示增殖細胞。同時結(jié)合其它細胞標記物，雙重染色，可判斷增殖細胞的種類，增殖速度，對研究細胞動力學有重要意義。因組織細胞內(nèi)無內(nèi)源性Brdu存在，所以Brdu應用較廣摻入雙鏈DNA內(nèi)的Brdu,以氫鏈與腺呤結(jié)合，不能直接與抗Brdu反應，需經(jīng)解鏈使Brdu暴露方能被染色。常用的解鏈方法為鹽酸加熱、蛋白酶處理等，使DNA雙鏈部分單鏈化，抗Brdu小鼠單與增殖細胞核內(nèi)的Brdu結(jié)合，再經(jīng)酶標抗小鼠IgG孵育、



呈色，顯示進入S期細胞的情況。(7)24小時后棄去培養(yǎng)液(看細胞貼壁情況)，PBS沖洗2-3次去除末貼壁細胞，加入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)中常見的污染及解決方法

原生動物污染

原生動物污染后，細胞培養(yǎng)基變得輕微渾濁。在顯微鏡下，大量的小點來回移動。雖然此時細胞仍能生長，但繁殖速度減慢，細胞生長狀態(tài)不好，邊緣不清，變得不透明。原生動物與細胞形成共生關(guān)系。同時，原生動物與細胞競爭營養(yǎng)。這種共生現(xiàn)象非常普遍，但以細胞為主，因為原生動物的數(shù)量相對較少，因而對細胞的正常生長沒有影響，只有當它們達到一定數(shù)量時，才終爆發(fā)成為循環(huán)。25%胰蛋白酶消化并輕輕吹打，使之成為單細胞，作活l細胞計數(shù)，用含20%胎牛血l清的DMEM培養(yǎng)液調(diào)整細胞密度至1x106細胞/L。

解決方法：原生動物污染的原因有很多，如液體消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等，如果細胞足夠，果斷丟棄被污染的細胞和復蘇細胞。如果要保留，需要購買使用相關(guān)的滅菌試劑。