蛋白質(zhì)互作驗證服務(wù)

在后基因組時代，基因的表達產(chǎn)物蛋白質(zhì)作為生物功能直接的執(zhí)行者和體現(xiàn)者，在生物集體的生理及病理中扮演著重要的角色。高通量的蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)可以在上述過程中篩選出具有潛在價值的生物標記和靶點。但是長期以來，大規(guī)模的蛋白質(zhì)表達分析譜并沒有提升我們對生物標志物的認識，其主要原因是差異蛋白的分析結(jié)果缺乏規(guī)?；尿炞C。實驗流程：細胞固定-細胞膜破膜-蛋白封閉-目的蛋白結(jié)合-熒光二抗結(jié)合-DAPI染色-熒光顯微鏡拍照或激光共聚焦顯微鏡拍照。

活性氧檢測試劑盒（Reactive oxygen species assay kit）是一種利用熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測的試劑盒。DCFH-DA本身沒有熒光，可以自由穿過細胞膜，進入細胞內(nèi)后，可以被細胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜，從而使探針很容易被裝載到細胞內(nèi)。細胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細胞內(nèi)活性氧的水平。 本試劑盒提供了活性氧陽性對照試劑Rosup以便于活性氧的檢測。Rosup是一種混合物（compound mixture），濃度為50mg/ml。蛋白質(zhì)定量組學(xué)服務(wù)細胞內(nèi)蛋白質(zhì)組豐度的動態(tài)變化對不同生命過程有重要影響。

一、注意事項

1、探針裝載后，一定要洗凈殘余的未進入細胞內(nèi)的探針，否則會導(dǎo)致背景較高。

2、探針裝載完畢并洗凈殘余探針后，可以進行激發(fā)波長的掃描和發(fā)射波長的掃描，以確認探針的裝載情況是否良好。

3、盡量縮短探針裝載后到測定所用的時間（刺激時間除外），以減少各種可能的誤差。

4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

通?；钚匝蹶栃詫φ赵诖碳ぜ毎?0-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。

收集細胞后裝載探針：按照1：1000用無培養(yǎng)液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10微摩爾/升。細胞收集后懸浮于稀釋好的DCFH-DA中，細胞濃度為一百萬至二千萬/毫升，37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細胞充分接觸。用無細胞培養(yǎng)液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內(nèi)的DCFH-DA。直接用活性氧陽性對照及自己感興趣的刺激細胞，或把細胞等分成若干份后刺激細胞。通?；钚匝蹶栃詫φ赵诖碳ぜ毎?0-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。分離培養(yǎng):將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍瓊脂平板上，36士1°C培養(yǎng)18-24h，觀察菌落形態(tài)。

2.、檢測

對于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察，或收集細胞后用熒光分光光度計、熒光或流式細胞儀檢測。

對于收集細胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光或流式細胞儀檢測，用激光共聚焦顯微鏡直接觀察也可以。

蛋白質(zhì)的分離純化在生物化學(xué)研究應(yīng)用中使用廣泛，是一項重要的操作技術(shù)。 一個典型的真核細胞可以包含數(shù)以千計的不同蛋白質(zhì)，一些含量十分豐富，一些僅含有幾個拷貝。為了研究某一個蛋白質(zhì)，必須首先將該蛋白質(zhì)從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化出來。

一、主要方法

1. 蛋白質(zhì)的選擇吸附分離（利用顆粒不同程度的顆粒吸附力來使分離的目的達到）。

2. 按照配體特性的分離-親和層析（利用蛋白質(zhì)分子與另一種稱為配體的分子能夠特異結(jié)合這一生物性質(zhì)）。

3. 低溫沉淀法，使用如，乙醇等與水可混溶的，降低多數(shù)蛋白質(zhì)的溶解度并且將其析出，和鹽析相比較，這種方法的分辨率更加的高，然而蛋白質(zhì)比較容易變形，需要在低溫下進行。

4. 按照分子大小不一樣的方法，密度梯度離心（在介質(zhì)中對蛋白質(zhì)離心時，蛋白質(zhì)沉降速度取決于它的質(zhì)量和密度，質(zhì)量和密度越大，那么沉降越快；凝膠過濾（一種柱層析）；超過濾（利用蛋白質(zhì)分子不能從半透膜通過的性質(zhì)）。

5. 按照溶解度差異分離，等電點沉淀法鹽溶與鹽析（使用一定濃度鹽溶液來使蛋白質(zhì)的溶解度增大或減?。?；（因為在等電點時蛋白質(zhì)分子的凈電荷為 0，使分子間靜電斥力減少了，所以，聚集沉淀比較容易，這時具有小的溶解度）。

6. 按照電荷不同的分離方法。主要分為離子交換層析和電泳分離。