紐斯特生物技術(shù)有限公司推出的Cdc42活性檢測(cè)試劑盒主要是依據(jù)單克l隆抗l體能夠特異性的識(shí)別Cdc42-GTP結(jié)合蛋白，而不識(shí)別Cdc42-GDP結(jié)合蛋白，進(jìn)而簡(jiǎn)單并且快速的進(jìn)行Cdc42的活性檢測(cè)。同時(shí)試劑盒中的Cdc42-GTP單克l隆抗l體也可以進(jìn)行免l疫組化實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞和組織中Cdc42的活性監(jiān)測(cè)。每套試劑盒可以進(jìn)行20次檢測(cè)。

檢測(cè)原理

    武漢紐斯特生物技術(shù)有限公司的Cdc42活性檢測(cè)試劑盒主要是利用識(shí)別蛋白特異形態(tài)的Cdc42-GTP單克l隆抗l體特異性的去檢測(cè)細(xì)胞提取物或者體外的（樣品需要進(jìn)行GTPγS活化處理）活性Cdc42-GTP的水平。簡(jiǎn)言之，特異性識(shí)別Cdc42活化構(gòu)象的鼠單克l隆抗l體可以特異性結(jié)合細(xì)胞裂解液中的Cdc42-GTP活性蛋白，然后利用protein A/G將抗原抗l體的結(jié)合物吸附下來，再利用特異性識(shí)別Cdc42活化構(gòu)象的兔多克l隆抗l體進(jìn)行免l疫印跡分析進(jìn)行檢測(cè)。

電泳和轉(zhuǎn)膜

1. 取15ul樣品/孔上樣17%配體膠。

2. 按照制造商的說明進(jìn)行SDS-PAGE。

3. 按照制造商的說明將凝膠蛋白轉(zhuǎn)到PVDF或硝化纖l維素膜。

免l疫印跡反應(yīng)和檢測(cè)（所有步驟都是在室溫下進(jìn)行，并不斷攪拌）

1. 將PVDF膜浸入100%甲l醇15s，然后在室溫放置5 min晾干。

注意：如果使用的是硝化纖l維素膜，此步省略。

2. 封閉：用TBST緩沖液配制5%的脫脂牛奶或者3%BSA在室溫下孵育1H進(jìn)行封閉，并需要恒定振蕩。

3. 孵育一抗：用TBST緩沖液配制的5%脫脂牛奶或3%BSA稀釋特異性識(shí)別Cdc42活性構(gòu)象的兔多克l隆抗l體（稀釋比例為1:50-1:1000，主要根據(jù)樣品中含有的Cdc42蛋白的量），室溫下孵育1-2小時(shí)，或者4°C條件下過夜孵育。

4. 用TBST緩沖液洗滌膜三次/5min。

5. 孵育二抗：（例如羊抗兔IgG-HRP），用TBST緩沖液配制的5%脫脂牛奶或3%BSA按1:1000稀釋比例稀釋后使用，室溫下孵育1小時(shí)并恒定振蕩。

6. 用TBST緩沖液洗滌膜三次/5min。

7. 使用實(shí)驗(yàn)者所選擇的檢測(cè)方法進(jìn)行顯色如ECL顯色法。

GTPases的Rab家族調(diào)節(jié)真核水泡膜運(yùn)輸。 Rab35與兩個(gè)血漿

膜和內(nèi)體定位，并涉及到包括T細(xì)胞受體回收，卵母細(xì)胞卵黃蛋白回收和胞質(zhì)分裂在內(nèi)的各種過程。 Rab35調(diào)節(jié)神經(jīng)元樣細(xì)胞中的神經(jīng)突生長(zhǎng)，并可以誘導(dǎo)突起。

當(dāng)前沒有直接測(cè)定法來測(cè)量Rab35 GTPases的活化。

NewEast Biosciences Rab35激l活檢測(cè)試劑盒基于特定于配置的單克l隆

特異性識(shí)別Rab35 GTP而不識(shí)別Rab Rab35 GDP的抗l體。鑒于...的高度親和力

抗原的單克l隆抗l體，可以在短時(shí)間內(nèi)進(jìn)行激l活測(cè)定。這個(gè)

分析提供了可靠的結(jié)果，并具有一致的可重復(fù)性。

這些抗Rab35 GTP單克l隆抗l體也可以用于監(jiān)測(cè)大鼠Rab35的激l活。

1細(xì)胞和組織中的免l疫組織化學(xué)。

NewEast Biosciences Rab35激l活檢測(cè)試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單快速的方法來監(jiān)測(cè)

Rab35的激l活。每個(gè)試劑盒均提供足夠的量以執(zhí)行20個(gè)測(cè)定。