等溫核酸試劑盒

普通的提取實(shí)驗(yàn)用國產(chǎn)的試劑盒就足以，價(jià)格不高，基本上各地均有現(xiàn)貨，如天根（目前國內(nèi)生產(chǎn)的試劑盒中銷售面比較廣的一種）等，其價(jià)格比進(jìn)口試劑盒要便宜許多，且效果還不錯(cuò)，還可以。

當(dāng)然，就RNA的提取而言，不一定試劑盒的提取效果就非常好，其實(shí)采用一些經(jīng)典的RNA提取方法，效果也很不錯(cuò)，如：TRIZOL、EDTA等，只是試劑盒使用方便，經(jīng)典的方法操作復(fù)雜一些。

核酸試劑盒的原理

核酸檢測，其實(shí)就是通過檢測熒光信號(hào)的累積來確定樣本中是否有病毒核酸?，F(xiàn)在核酸檢測試劑盒（多重?zé)晒釸T-PCR法），能夠?qū)崿F(xiàn)一小時(shí)快速診斷。

根據(jù)銳科技發(fā)布的文章《如何進(jìn)行核酸檢測帶你揭秘全過程》，目前的病毒核酸檢測試劑盒，多數(shù)采用熒光定量PCR方法。檢測原理是以病毒的基因序列為檢測靶標(biāo)，通過PCR擴(kuò)增，使我們的選擇這段靶標(biāo)DNA序列指數(shù)級(jí)增加，每一個(gè)擴(kuò)增出來的DNA序列，都可與我們預(yù)先加入的一段熒光標(biāo)記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)，擴(kuò)增出來的靶基因越多，累計(jì)的熒光信號(hào)就越強(qiáng)。

試劑盒

英國TwistDx Inc公司開發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)--被稱為是可以替代PCR的核酸檢測技術(shù)，目前新的等溫?cái)U(kuò)增檢測技術(shù)。以此為基礎(chǔ)的TwistAmp? 核酸擴(kuò)增產(chǎn)品，能夠在15分鐘內(nèi)進(jìn)行常溫下的單分子核酸檢測。該技術(shù)對(duì)硬件設(shè)備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物防御和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。常規(guī)PCR必須經(jīng)過變性、退火、延伸三個(gè)步驟，而PCR儀本質(zhì)上就是一個(gè)控制溫度升降的設(shè)備。RPA反應(yīng)的適宜溫度在37°C - 42°C之間，無需變性，在常溫下即可進(jìn)行。這無疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要溫控設(shè)備，RPA可以真正實(shí)現(xiàn)便攜式的快速核酸檢測。據(jù)介紹，RPA檢測的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴(kuò)增到可以檢出的水平，從單個(gè)模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理，適用于無法提取核酸的實(shí)地檢測。RPA不僅可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行終點(diǎn)檢測，還可以對(duì)擴(kuò)增過程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控，甚至可以通過試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。

目前，TwistAmp? 試劑盒的擴(kuò)增子長度在500bp以內(nèi)。不過，經(jīng)過特別優(yōu)化的RPA擴(kuò)增，也可以生成更長的擴(kuò)增產(chǎn)物，或者減慢擴(kuò)增速度(便于定量)，甚至在更低的溫度下進(jìn)行反應(yīng)。

基本檢測原理是首先將待檢產(chǎn)物和兩種檢測物混合，特異性結(jié)合后形成帶有兩種標(biāo)記（生物素和FITC）的復(fù)合物；隨后將該復(fù)合物滴加到試紙條的加樣區(qū)，與加樣區(qū)的膠體金顆粒結(jié)合，新形成的復(fù)合物在層析膜擴(kuò)散作用下擴(kuò)散至檢測線，只有標(biāo)記有生物素的復(fù)合物會(huì)被生物素配體捕獲，從而使檢測線“顯色”，而未結(jié)合檢測物的膠體金顆粒會(huì)繼續(xù)擴(kuò)散至質(zhì)控線并捕獲進(jìn)而使質(zhì)控線“顯色”。