熒光分光光度計

熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù)，從各個角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過對這些參數(shù)的測定， 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化， 從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm?？捎糜谝后w、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。

分子結(jié)構(gòu)與熒光

并不是所有的分子都能產(chǎn)生熒光，分子產(chǎn)生熒光必須具有：合適的結(jié)構(gòu)和一定的熒光產(chǎn)率。熒光產(chǎn)生與分子結(jié)構(gòu)的關(guān)系如下：

（1）電子躍遷類型。大多數(shù)熒光化合物都是由π→π*或n→π*躍遷激發(fā)，然后經(jīng)過振動弛豫或其他非輻射躍遷，在發(fā)生π*→π或π*→n躍遷而產(chǎn)生熒光，其中π*→π熒光效率。

（2）共軛效應(yīng)。含有π*→π躍遷能級的芳香族化合物的熒光常見且。具有較大共軛體系或脂環(huán)羰基結(jié)構(gòu)的脂肪族化合物也可能產(chǎn)生熒光。

（3）取代基效應(yīng)。苯環(huán)上有吸電子基常常會妨礙熒光的產(chǎn)生，而給電子基會使熒光增強(qiáng)。

（4）平面剛性結(jié)構(gòu)。具有平面剛性結(jié)構(gòu)的有機(jī)分子大多具有強(qiáng)烈熒光，因為該結(jié)構(gòu)可降低分子振動，減少與溶劑的相互作用。

熒光光譜定量分析

在低濃度時，溶液的熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度成正比：F=Kc。其中，F(xiàn)為熒光強(qiáng)度，c為熒光物質(zhì)濃度，K為比例系數(shù)。這就是熒光光譜定量分析的依據(jù)。

上述關(guān)系不適用于熒光物質(zhì)濃度過高時，熒光物質(zhì)濃度過高，其熒光強(qiáng)度反而降低。原因有：

（1）內(nèi)濾效應(yīng)。一是，當(dāng)溶液濃度過高時，溶液中雜質(zhì)對入射光的吸收作用增大，相當(dāng)于降低了激發(fā)光的強(qiáng)度。二是，濃度過高時，入射光被液池前部的熒光物質(zhì)強(qiáng)烈吸收，處于液池中、后部的熒光物質(zhì)，則因受到入射光大大減弱而使熒光強(qiáng)度大大降低；而儀器的探測窗口通常對準(zhǔn)液池中部，從而導(dǎo)致檢測到的熒光強(qiáng)度大大降低。

（2）相互作用。較高濃度溶液中，可發(fā)生溶質(zhì)間的相互作用，產(chǎn)生熒光物質(zhì)的激發(fā)態(tài)分子與其基態(tài)分子的二聚物或其他溶質(zhì)分子的復(fù)合物，從而導(dǎo)致熒光光譜的改變和/或熒光強(qiáng)度下降。當(dāng)濃度更大時，甚至?xí)纬蔁晒馕镔|(zhì)的基態(tài)分子聚集體，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度更嚴(yán)重下降。

（3）自淬滅。熒光物質(zhì)的發(fā)射光譜與其吸收光譜呈現(xiàn)重疊，便可能發(fā)生所發(fā)射的熒光被部分再吸收的現(xiàn)象，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降。溶液濃度增大時會促使再吸收現(xiàn)象加劇。

當(dāng)然，熒光強(qiáng)度的影響因素還有溶劑、溫度、pH值、散射光等，在定量分析中需要加以考慮。

熒光光譜定量分析的計算與其他光譜類似，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線法、比例法等。

線熒光光譜儀用途與安全事項

x射線熒光光譜儀用途與安全事項，x射線熒光光譜儀提供了一種，準(zhǔn)確，的分析方法，可用于確定多種類型材料的化學(xué)成分。它是無損且可靠的，不需要或只需很少的樣品制備，適用于固體，液體和粉末狀樣品。它可以用于從鈉到鈾的多種元素，并提供亞ppm級以下的檢測限；它也可以輕松，同時地測量高達(dá)100％的濃度。