低溫生物菌種——菌種分離方法介紹

孢子分離又可分為以下幾種方法：

( 1 ）褶上涂抹法：選取新鮮、健壯、未開(kāi)傘、未裂破的子實(shí)體，洗凈后用75 %酒精表面滅菌2 分鐘，然后連同培養(yǎng)基一起放入接種箱內(nèi)，經(jīng)熏蒸消毒12 ～ 24 小時(shí)，再按無(wú)菌操作技術(shù)將接種環(huán)在子實(shí)體菌褶上涂抹，把涂抹后帶孢子的接種環(huán)在培養(yǎng)基上劃線(xiàn)接種，，后置于25 ～ 28 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，可得純菌種。

( 2 ）孢子印采集法：取滅過(guò)菌的載玻片、試紙或黑布，置于新鮮、未開(kāi)傘或未開(kāi)裂的子體菌褶的下方。經(jīng)24 小時(shí)后，便落下孢子，形成印痕（即孢子?。?。然后，用接種環(huán)或玻璃棒蘸取孢子，接種在平面或斜面培養(yǎng)基上，進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，可得純菌種。

( 3 ）孢子收集器采集法：孢子收集器由玻璃鐘罩、培養(yǎng)皿、三角架、搪瓷盤(pán)等組成。鐘罩下為一搪瓷盤(pán)，直徑25 厘米左右，盤(pán)內(nèi)先墊襯4～6 層紗布，中央放1 副9 厘米直徑的培養(yǎng)皿，大蓋口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培養(yǎng)皿上放1 只鉛絲繞成的三角架，再將帶孔的玻璃鐘罩蓋上，頂上罩孔用棉塞塞好，用紗布包好整個(gè)孢子收集器，置于高壓滅菌鍋或蒸籠內(nèi)滅菌2小時(shí)。

孢子收集器滅菌消毒后，放入無(wú)菌室或無(wú)菌箱內(nèi)。然后，用小刀割取1 塊4～5 厘米大小的子實(shí)體，插在收集器內(nèi)的三角架頂上（若無(wú)孢子收集器，也可用培養(yǎng)皿代替）。再置于溫度24 ～26 ℃下培養(yǎng)24 小時(shí)，培養(yǎng)皿中便可見(jiàn)到白色粉狀物，此即為孢子。此時(shí)，可將孢子收集器再移至接種箱內(nèi)，取出培養(yǎng)皿，蓋好，并在培養(yǎng)皿內(nèi)加入10 ～ 20 毫升的無(wú)菌水，使孢子散于本中，成為孢子懸浮液。然后，再用無(wú)菌打針筒或吸管吸取孢子懸浮液，接種于試管斜面培養(yǎng)基上，每管注2 ～ 3 滴。置于24 ～ 26 ℃溫度下培養(yǎng)5 ～ 7 天，培養(yǎng)基上便可長(zhǎng)出白色菌落。待菌落直徑有0 . 5 厘米時(shí)，選健壯的菌落，再移接于另一試管的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)。當(dāng)白色菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)試管時(shí)，便得純菌種。

低溫生物菌種——菌種分離方法

寄主分離法即從生長(zhǎng)有某種真菌的寄主體上（如茯苓、木耳木段）取下木片，進(jìn)行分離的方法。如木耳制種時(shí)，可選朵大、出耳多、質(zhì)厚的耳棒（即長(zhǎng)有木耳的木段）。采集后，削去耳根下的樹(shù)皮，將其橫斷面鋸成1 厘米厚的木片，在無(wú)菌條件下，切去無(wú)耳菌絲部分，留下有耳菌絲部分，浸入水中1 分鐘，取出再用無(wú)菌水沖去木片上的液體。然后，用解剖刀將木片切成0 . 5 厘米的小塊，放入斜面培養(yǎng)基內(nèi)，置24 ～26 ℃下培養(yǎng)，及時(shí)淘汰雜菌，選取純菌絲進(jìn)行移植培養(yǎng)，即得菌種。

低溫生物產(chǎn)品特性

自古以來(lái)生物的產(chǎn)品具有高選擇性、高轉(zhuǎn)化率和高轉(zhuǎn)化速度的特性，可以在常溫、低壓或中壓的發(fā)酵條件下進(jìn)行生產(chǎn)。該產(chǎn)品還具有以下特點(diǎn)：

1、易工程化：采用通用性強(qiáng)的發(fā)酵工藝和設(shè)備，適應(yīng)規(guī)?；a(chǎn)；

2、高度靈活：代謝對(duì)H?/CO/CO?沒(méi)有比例要求；

3、條件溫和：常溫、低壓或中壓等溫和條件下操作；

4、耐受性高：抗雜菌、對(duì)硫化物等常規(guī)雜質(zhì)具有較強(qiáng)耐受性；

5、高經(jīng)濟(jì)性：生產(chǎn)項(xiàng)目建設(shè)投資低，1-2年可收回建設(shè)投資，投資回報(bào)率高；

6、綠色生產(chǎn)：利用H?、CO和CO?氣體，固定二氧化碳, 節(jié)能減排降污染，能耗低，低水耗，環(huán)境友好。

生物菌種存活必備條件

1、保持土壤合理濕度

高溫悶棚前，菜農(nóng)多進(jìn)行土壤翻耕，使得澆水水量極大，土壤濕度過(guò)高，通透性差，影響生物菌的增殖。因此，悶棚澆水時(shí)，要先起壟，澆小水保證土壤較為濕潤(rùn)即可，不要大水漫灌。

2、閉棚后不要立即升溫

底肥需要生物菌發(fā)酵，若翻入土壤后立即澆水升溫，多數(shù)菌種被扼殺，僅有少量嗜熱菌可以存活，但糞肥發(fā)酵僅靠嗜熱菌是完成不了的。

建議菜農(nóng)翻地澆水后間隔幾天，待土壤濕度降低，生物菌大量繁殖后再覆蓋地膜、關(guān)閉通風(fēng)口進(jìn)行悶棚，此時(shí)低溫菌種已經(jīng)發(fā)揮作用，可以產(chǎn)生大量熱量輔助悶棚，可大大改善悶棚效果。

3、促進(jìn)生物菌快速繁殖

想要促進(jìn)微生物快速增殖，可使用菌種含量高的菌劑，例如20億的，可充分發(fā)揮菌劑作用。菜農(nóng)要學(xué)會(huì)換位思考，生物菌喜歡什么樣的條件，就創(chuàng)造什么樣的條件，如此才能確保悶棚效果。