為避免提取的核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán)，造成標(biāo)本之間的交叉污染，出現(xiàn)假陽性結(jié)果，該區(qū)域配備的生物安全柜必須是B2型的。生物安全柜工作區(qū)垂直氣流全部來自實驗室，排風(fēng)經(jīng)過過濾器(www.rfilter.com)過濾后直接排至室外，不允許回到安全柜和實驗室中。

根據(jù)經(jīng)驗，如果實驗室內(nèi)配備生物安全柜，每配備一臺，實驗室的面積增加10m2;標(biāo)本制備區(qū)的面積宜在25m2~30m2之間。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。

擴增室該區(qū)域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。

在巢式PCR測定中，通常在輪擴增后必須打開反應(yīng)管，因此巢式擴增有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進行。

擴增室主要配備PCR實驗室的核心儀器PCR儀，本文實例中使用了ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。

在實驗室建造過程中，需要給PCR儀配備專門的UPS電源，以保證其正常工作。該區(qū)面積控制在15m2~20m2。

本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行。建議采用5~10Pa壓差，在控制上比較容易實現(xiàn)。

產(chǎn)物分析區(qū)該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。如使用全自動封閉分析儀器檢測，此區(qū)域可不設(shè)。

在室內(nèi)配備通風(fēng)櫥，保證房間內(nèi)的相對負(fù)壓，空氣從室外流向室內(nèi)。該區(qū)面積控制在15m2~20m2。

本區(qū)是的擴增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負(fù)壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。建議采用5~10Pa壓差，在控制上比較容易實現(xiàn)。

03正負(fù)壓區(qū)域緩沖室的設(shè)置

根據(jù)壓力梯度的要求，試劑配制室和樣品處理室為相對正壓，擴增室和產(chǎn)物分析室為相對負(fù)壓，要求正壓的區(qū)域和要求負(fù)壓的區(qū)域的緩沖室內(nèi)的壓力設(shè)計大不相同。

正壓緩沖室符合一般正壓潔凈室的緩沖原則，主要是防止室外環(huán)境空氣中的氣溶膠進入室內(nèi)。

負(fù)壓緩沖室則是要求緩沖室對核酸擴增室及產(chǎn)物分析區(qū)保持正壓，對緩沖室外也保持正壓(主要是滿足室內(nèi)凈化需要，如室內(nèi)無潔凈要求，此處可以為0壓)。

4

供電系統(tǒng)

■

配電形式滿足雙電源的供電需求；

同時對于一些重要實驗儀器設(shè)備、送排風(fēng)裝置、照明及門禁安防裝置配備UPS電源，供電時間不小于15min；

所有進出管線、室內(nèi)外露可導(dǎo)電部分均采用等電位連接，當(dāng)檢測裝置整體固定安裝時考慮增設(shè)人工接地極，并與預(yù)留接地端，子箱可靠焊接形成閉合電氣通路；

各區(qū)域考慮設(shè)計照度為：機電用房100lx、更衣洗消緩沖區(qū)域200lx、實驗區(qū)域300lx；

除正常照明外，所有實驗工作房間均設(shè)有紫外線殺菌燈，并于機電用房設(shè)有開關(guān)控制；

所有燈具均采用潔凈燈具，所有光源均采用led光源，要求顯色指數(shù)Ra大于80，特殊顯色指數(shù)R9大于0。

5

裝飾裝修

實驗區(qū)地面采用PVC卷材，墻體、吊頂采用夾芯玻鎂彩鋼板。

除地面外，機電區(qū)和實驗區(qū)的裝修保持一致。

實驗區(qū)采用成品不銹鋼潔凈室專用門，配有中空玻璃觀察窗、門鎖、把手、閉門器、升降密封條、電子互鎖。

傳遞窗采用不銹鋼傳遞窗，配有電子互鎖、紫外燈，預(yù)留接口可根據(jù)需要增加排風(fēng)、消毒液噴淋等。

PCR實驗部分不設(shè)置外窗，實驗室光源為人工光源。