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武漢默沙克生物????科技有限公司是一家專門從事生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)的企業(yè)。目前可提供各種抗1體、免疫學(xué)試劑盒、生化試劑、ELISA試劑盒、分子生物學(xué)試劑等多用途多屬種的高品質(zhì)產(chǎn)品,服務(wù)涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。
心肌細(xì)胞首先合成108個氨基酸的BNP原,稱之為proBNP(BNP前體)。在受到心肌細(xì)胞的刺激后(例如,心肌細(xì)胞拉伸),proBNP在蛋白酶作用下列解為NT-proBNP(氨基末端- proBNP或N端-proBNP)和生物活性激1素BNP。兩種多肽都釋放進(jìn)入血循環(huán)。用無熱原、無內(nèi)毒1素的試管或離心管采集血液標(biāo)本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜,使血1清析出。兩者來源相同并且等摩爾分泌。
BNP與NT-proBNP的不同點主要有如下幾點:
通常我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,如血1清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理方法是不一樣的。心肌細(xì)胞首先合成108個氨基酸的BNP原,稱之為proBNP(BNP前體)。正確的處理樣本是保證ELISA檢測的正確性和準(zhǔn)確性的步,下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理方法。1、 血1清
血1清是1常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單。
用無熱原、無內(nèi)毒1素的試管或離心管采集血液標(biāo)本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜,使血1清析出。(1好將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血1清更大程度的析出。②用小鑷子夾取預(yù)先用刀片割開的蠟帶,放在乙醇溶液的水面上,使切片展開。)4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細(xì)收集上清。建議將血1清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
IgG可被木瓜蛋白酶分解為三個區(qū)段,其中兩個相同的區(qū)段稱抗原結(jié)合片段(Fab)。每個Fab都保存結(jié)合抗原的能力,但只有一個抗原結(jié)合位點,是單價的,與抗原結(jié)合后不出現(xiàn)凝集或沉淀。另一區(qū)段稱Fc段,無抗1體活性,但具有IgG特有的抗原性。
IgG可被胃蛋白酶分解為兩個片段,一個Fab雙體,稱F(ab')2,能和兩個相同的抗原結(jié)合;另一片段類似Fc,隨后被分解成小分子多肽,無生物活性。
IgM是由五個單體組成的五聚體,含 10個重鏈和10個輕鏈,具有10個抗原結(jié)合價,由于空間位置的影響,只表現(xiàn)為五個抗原結(jié)合價。IgM分子量約為900000,IgG分子量約為150000。
17.脫水Ⅱ
將切片放入95%乙醇中洗去多余的紅色,然后放入無水乙醇中3-5min。后用吸水紙吸干多余的乙醇。
18.透明
切片放入二甲本Ⅰ、Ⅱ中各5min。
二甲本應(yīng)盡量保持無水,應(yīng)經(jīng)常更換,或用紗布包無水硫1酸銅放入染色缸內(nèi)吸收水分。切片如在二甲本中出現(xiàn)白霧現(xiàn)象,說明脫水未盡,應(yīng)退回乙醇中重新脫水,否則切片難以鏡檢。
19.封藏:中性樹膠封存
因切片經(jīng)二甲本透明,使用中性樹膠作為封藏劑,樹膠可用二甲本稀釋至合適的稠度。