ELISA試劑盒的操作方法——間接法

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1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；

2.次日洗滌3次；

3.加一定稀釋的待檢樣品（未知）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；

4.（同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二（抗）0.1ml；

5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；

6.然后用DDW洗滌。

其余步驟同“雙夾心法”的4、5、6。

ELISA試劑盒的發(fā)展前景

臨床測(cè)定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展，而方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進(jìn)步更新和型標(biāo)記物的應(yīng)用。分子生物學(xué)正在并肯定會(huì)讓對(duì)整個(gè)生命科學(xué)有一個(gè)徹底的認(rèn)識(shí)，其對(duì)測(cè)定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的，對(duì)以些難以檢測(cè)的生物活性物質(zhì)的測(cè)定，并且大大提高了檢測(cè)的靈敏度和特異性。

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ELISA試劑盒——會(huì)出現(xiàn)的問題及解決辦法

陰性標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值低于陽性標(biāo)準(zhǔn)品的吸光值。

a.原因：微孔中的試劑未能充分混合。

解決辦法： 試劑加完后，需輕敲盤四周使其充分混合均勻。

b.原因：洗板過程發(fā)生問題。

解決辦法：請(qǐng)隨時(shí)監(jiān)控洗板過程，洗完后立即進(jìn)行下一步驟。

c.原因：添加樣品或酶標(biāo)記物的量不一致。

解決辦法：請(qǐng)使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性。

Elisa試劑盒有哪些需要注意的？

1. 跟著病況的進(jìn)展或由其他因素影響，某些在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動(dòng)搖，因此有必要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理。間接法測(cè)定中，標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反響。

2. 加樣一般運(yùn)用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加間斷液。加標(biāo)本時(shí)有必要每份標(biāo)本運(yùn)用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和間斷液時(shí)則不需更換吸嘴。

3.在成批手藝檢測(cè)中，還應(yīng)留神操作時(shí)差的影響。加樣及混勻時(shí)間的差異，使抗原反響和酶促反響時(shí)間不一致，對(duì)競(jìng)爭(zhēng)法及定量檢測(cè)影響很大，不留神可能會(huì)導(dǎo)致過錯(cuò)效果或定量不準(zhǔn)。