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洋蔥亞細(xì)胞定位培養(yǎng)電話 思特進(jìn)

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發(fā)布時(shí)間:2021-05-16 08:45  






武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。目的:分析增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)與蛋白激酶C-θ(PKCθ)的融合蛋白(PKCθ-EGFP)在HeLa細(xì)胞中的表達(dá)、亞細(xì)胞定位及其對細(xì)胞形態(tài)的影響。




亞細(xì)胞定位是指某種蛋白或表達(dá)產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)的具體存在部位。例如在核內(nèi)、胞質(zhì)內(nèi)或者細(xì)胞膜上存在。GFP是綠色熒光蛋白,在掃描共聚焦顯微鏡的激光照射下會發(fā)出綠色熒光,從而可以地定位蛋白質(zhì)的位置。


武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺、細(xì)胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達(dá)平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。Real-TimePCR結(jié)果表明,OsSsrl基因在水稻不同不同組織中均有表達(dá),在葉部的表達(dá)量,其次為根,在幼穗中的表達(dá)量。




幾丁質(zhì)酶(chitinase)是一種能夠?qū)锥≠|(zhì)水解成N-乙酰葡糖胺的糖苷酶,廣泛存在于植物細(xì)胞中,是抗真菌防衛(wèi)反應(yīng)體系的重要組成部分.該文深入分析了1種三七幾丁質(zhì)酶基因PnCHI1的功能.構(gòu)建PnCHI1的亞細(xì)胞定位載體,轉(zhuǎn)入洋蔥表皮細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá),在激光掃描共聚焦顯微鏡下發(fā)現(xiàn)PnCHI1定位于細(xì)胞壁中.構(gòu)建PnCHI1的原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)并純化獲得重組蛋白,體外平板抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PnCHI1原核重組蛋白對尖孢鐮刀菌、茄腐鐮刀菌、輪枝鐮刀菌3種三七根腐病菌的菌絲生長具有很強(qiáng)的抑制活性.采用反向遺傳學(xué)技術(shù)驗(yàn)證PnCHI1的功能,通過根癌農(nóng)介導(dǎo)將PnCHI1轉(zhuǎn)入中過量表達(dá).qRT-PCR分析結(jié)果表明PnCHI1在T2代轉(zhuǎn)基因中大量表達(dá),同時(shí)葉片接種實(shí)驗(yàn)顯示PnCHI1轉(zhuǎn)基因?qū)η迅牭毒目剐栽鰪?qiáng)明顯.結(jié)論:PnCHI1是定位于細(xì)胞壁的幾丁質(zhì)酶,體外能抑制幾種三七根腐病真菌,在過表達(dá)大大提高了對茄腐鐮刀菌的抗性,推測PnCHI1是三七中參與根腐病防衛(wèi)反應(yīng)的重要抗病基因.


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F-box蛋白通過在UPP(泛素-蛋白酶體途徑)中特異識別底物蛋白而參與細(xì)胞周期調(diào)控、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、細(xì)胞凋亡、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等生命活動。很多研究結(jié)果表明F-box蛋白通過SCF復(fù)合體調(diào)節(jié)多種的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,如IAA、JA、GA和乙烯的信號傳導(dǎo),并且與植物對非生物脅迫的響應(yīng)有很大的關(guān)系。故其對植物抗逆性研究有重要意義。鷹嘴豆是世界第三大豆類作物,主要生長在干旱和半干旱地區(qū)。它具有生育期短,基因組小的特點(diǎn)。經(jīng)過長時(shí)間的進(jìn)化和對不良環(huán)境的適應(yīng),鷹嘴豆具有了豐富的耐旱、耐低溫和耐鹽堿等抗逆基因,因此具有其自身的優(yōu)勢來研究植物的抗逆機(jī)制。其保守的WRKY結(jié)構(gòu)域能與下游基因啟動子W-box特異性結(jié)合,從而調(diào)控下游基因的表達(dá)水平。目前,鷹嘴豆在分子生物學(xué)方面的研究較為少。 本研究從EST庫中挑選到兩個(gè)F-box蛋白基因在干旱脅迫下表達(dá),采用RACE技術(shù)其全長,并對目的基因進(jìn)行了初步的生物信息學(xué)分析和轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)譜分析,旨在為進(jìn)一步揭示鷹嘴豆F-box蛋白在植物的生長發(fā)育及在逆境信號傳導(dǎo)中的作用奠定理論基礎(chǔ)。 CarF-box1基因的開放閱讀框(ORF)長1093bp,編碼一條345個(gè)氨基酸殘基的多肽,含有F-box結(jié)構(gòu)域和Kelch結(jié)構(gòu)域。其理論等電點(diǎn)為5.38,分子量為38.37kDa。CarF-box1基因不含有內(nèi)含子。熒光定量PCR分析表明,CarF-box1在鷹嘴豆的根、莖、葉、花、成熟豆和成熟莢中均有表達(dá),在花中表達(dá)極高。


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